發(fā)布時間：2024-05-19 08:44

　　肝纖維化是多種肝病共同病理過程,肝星狀細胞激活則是導(dǎo)致肝臟纖維化發(fā)生的關(guān)鍵步驟。近年來的研究發(fā)現(xiàn)糖基化修飾在肝纖維化發(fā)生過程中發(fā)生了特異性的改變,有望成為新的肝纖維化治療靶點。其中一種重要的限速酶——β1,6N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V (N-acetylglucosaminyltransferase V,GnT-V)通過改變糖基化修飾調(diào)控腫瘤發(fā)生的作用已經(jīng)有所報道,然而GnT-V在肝纖維發(fā)生過程中的作用機制尚未明確。本論文的研究發(fā)現(xiàn)在硫代乙酰胺(TAA)誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型中,肝組織的GnT-V表達水平顯著上調(diào),而尾靜脈注射重組腺病毒載體表達靶向GnT-V的小干擾RNA,可以顯著減低肝組織GnT-V的表達水平并抑制TAA誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化。體外實驗則發(fā)現(xiàn)下調(diào)大鼠肝星狀細胞中GnT-V的表達水平能有效抑制肝星狀細胞的激活、增殖和遷移,減弱與上述過程密切相關(guān)的星狀細胞TGF-p/Smad和PDGF/Erk信號通路。免疫沉淀的結(jié)果也表明下調(diào)星狀細胞的GnT-V表達水平降低了TGF-p受體的N-型糖基化程度。我們還發(fā)現(xiàn)下調(diào)體外培養(yǎng)小鼠肝細胞的GnT-V表達水平能有效抑制肝細胞EMT過程的發(fā)生...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
綜述部分
    一、肝纖維化的研究進展
        1 肝纖維化簡介
        2 肝纖維化發(fā)生的機理
            2.1 肝臟構(gòu)造
            2.2 肝纖維化發(fā)生機理
        3 肝細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在肝纖維化發(fā)生過程中的作用
        4 肝纖維化動物模型
            4.1 化學(xué)藥物或毒物所致肝纖維化實驗動物模型
            4.2 膽管阻塞性肝纖維化模型(bile duct ligation,BDL)
            4.3 慢性酒精中毒性肝纖維化動物模型
            4.4 免疫法建立肝纖維化模型
            4.5 營養(yǎng)性肝纖維化動物模型
    二、肝星狀細胞在肝纖維化發(fā)生過程中的作用機制
        1 肝星狀細胞的功能
        2 與肝星狀細胞激活有關(guān)的信號通路
            2.1 PDGF/Erk信號通路
            2.2 TGF-β/Smad信號通路
            2.3 肝星狀細胞參與免疫應(yīng)答反應(yīng)
    三、糖基化在肝纖維化發(fā)生過程中的作用機制
        1 β1,6 N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V(β1,6 N-aeetylglucosaminyltransferase,GnT-V)在糖基化修飾中的作用
        2 糖基化與肝纖維化的關(guān)系
    參考文獻
實驗部分
    一、引言
    二、實驗儀器和材料
        1 實驗儀器
        2 實驗材料
    三、實驗方法
        1 TAA誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型
        2 重組腺病毒載體的構(gòu)建
        3 細胞流式分析
        4 HSC-T6增殖速度檢測
        5 細胞侵襲實驗
        6 細胞劃痕實驗
        7 肝臟羥脯氨酸含量及血清轉(zhuǎn)氨酶活性的測定
        8 肝臟組織HE染色、天狼星紅染色、免疫組化及免疫熒光染色
            8.1 組織的包埋與切片
            8.2 組織切片的HE染色
            8.3 組織切片的天狼星紅染色
            8.4 組織切片的免疫組織化學(xué)染色
            8.5 組織切片的免疫熒光染色
        9 Western-blot
            9.1 細胞蛋白提取
            9.2 組織蛋白提取
            9.3 制膠
            9.4 轉(zhuǎn)膜(濕法)
            9.5 免疫標記及顯影
        10 免疫共沉淀
        11 RNA提取及Q-PCR
            11.1 細胞RNA的提取
            11.2 組織RNA的提取
            11.3 逆轉(zhuǎn)錄體系(20μL)TaKaRa試劑盒
            11.4 Q-PCR體系(20μL)TaKaRa試劑盒
    四、實驗結(jié)果
        1 GnT-V表達水平在肝纖維化發(fā)生過程中的變化
        2 構(gòu)建能高效表達GnT-V shRNA的重組腺病毒
        3 下調(diào)GnT-V表達水平對肝星狀細胞活化程度的影響
        4 下調(diào)小鼠肝組織GnT-V表達能有效抑制肝纖維化發(fā)生
        5 HSC細胞GnT-V表達水平對TGF β受體N-型糖基化修飾和TGF-β／Smad信號通路的影響
        6 下調(diào)GnT-V表達對PDGF誘導(dǎo)的肝星狀細胞增殖和遷移及PDGF/Erk信號通路的作用
        7 GnT-V調(diào)控肝細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的作用研究
    五、小結(jié)及討論
致謝



本文編號：3977873