發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 21:34

　　目的:建立人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體（hucMSC-Ex）修復(fù)DSS誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病（IBD）模型,明確hucMSC-Ex修復(fù)IBD的作用,探討hucMSC-Ex通過(guò)下調(diào)巨噬細(xì)胞中IL-7的表達(dá)修復(fù)IBD的作用機(jī)制。方法:構(gòu)建hucMSC-Ex修復(fù)DSS誘導(dǎo)BALB/c小鼠IBD模型。將雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組,分別為陰性對(duì)照組、DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD模型組和DSS+hucMSC-Ex組。每天稱量小鼠體重、觀察小鼠的糞便變化以及病理分析等評(píng)價(jià)IBD變化的指標(biāo);第11天處死小鼠,收集結(jié)腸、脾臟組織做進(jìn)一步研究。觀察小鼠的脾臟及結(jié)腸的大體觀,提取RNA和蛋白等標(biāo)本,采用QRT-PCR方法檢測(cè)TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10等mRNA的表達(dá)水平,H&E染色結(jié)果分析結(jié)腸粘膜和脾臟組織損傷程度,評(píng)價(jià)hucMSC-Ex修復(fù)炎癥性腸病的效果。采用QRT-PCR和免疫組化檢測(cè)iNOS和CD206在三組小鼠結(jié)腸和脾臟組織中的表達(dá),分析hucMSC-Ex修復(fù)DSS誘導(dǎo)小鼠IBD時(shí)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量以及分泌相關(guān)細(xì)胞因子的變化。通過(guò)western-blot、免疫組織化學(xué)和... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HcuMSC-Ex的分析鑒定A:透射電子顯微鏡檢測(cè)hucMSC-Ex的分離純化，標(biāo)尺:100nm;B:NanoSight納米顆粒跟蹤分析儀檢測(cè)hucMSC-Ex直徑大小為40~100nm;C:Western-blot檢測(cè)hucMSC-Ex相關(guān)表面

圖 3.2 HucMSC-Ex 移植后在 IBD 小鼠組織的定位A: 用動(dòng)物活體成像系統(tǒng)檢測(cè) ICG 標(biāo)記 12h 的 hucMSC-Ex; B: ICG 標(biāo)記 12h 的 hucMSC-Ex尾靜脈注射進(jìn)入 IBD 小鼠并在活體動(dòng)物成像系統(tǒng)下檢測(cè)（ = 3）; C: 動(dòng)物活體成像系統(tǒng)檢測(cè)用 ICG 標(biāo)記的 hucMSC-Ex 處理的 IBD 小鼠結(jié)腸，脾臟和肝臟組織。Figure 3.2 Location in the IBD mice tissue after translation of hucMSC-ExA: Representative images of hucMSC-Ex labeled with ICG for 12 hours were detected under liveanimal imaging system. B: The IBD mice received intravenous injection of ICG-exosomes for 12hours and were detected under live animal imaging system ( = 3). C: The colon tissues, spleens,and livers of IBD mice treated with ICG-exosomes were detected under live animal imagingsystem.3.4 討論1983 年，有研究發(fā)現(xiàn)在網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟過(guò)程中微囊泡的分泌，最主要的微囊泡是 MV 和 exosome[104]。隨著對(duì) exosome 的不斷研究，發(fā)現(xiàn) exosome 是由多

鼠 IBD 模型組織形態(tài)和蛋白水平的變化趨勢(shì)人臍帶 MSC 移植修復(fù) DSS 誘導(dǎo) BALB/c 小鼠 IBD 模型，選別作為陰性對(duì)照組、DSS 誘導(dǎo)的小鼠 IBD 模型組、DSSC-Ex 組和 DSS 誘導(dǎo)損傷+hucMSC 組。陰性對(duì)照組小鼠飲用高SS 誘導(dǎo)的小鼠 IBD 模型組、DSS 誘導(dǎo)損傷+hucMSC-Ex 組和cMSC 組飲用高壓滅菌純凈水配制的 3%DSS 水，且 DSSC-Ex 組從飲用 3%DSS 水的第 5 天、第 8 天、第 11 天每只小鼠臍帶 MSC 來(lái)源的 exosome，同時(shí) DSS 誘導(dǎo)損傷+hucMSC 組當(dāng)觀察到陽(yáng)性組小鼠有明顯便血以及體重減輕等癥狀時(shí)，斷頸先每天稱量小鼠體重，發(fā)現(xiàn)正常組小鼠體重不斷上升，損傷組，而在第 5 天開(kāi)始經(jīng) hucMSC 和 hucMSC-Ex 作用后，小鼠體漸上升（圖 4.1）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Diet and nutritional factors in inflammatory bowel diseases[J]. Danuta Owczarek,Tomasz Rodacki,Renata Domaga?a-Rodacka,Dorota Cibor,Tomasz Mach.  World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
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[3]Colorectal cancer in inflammatory bowel disease:What is the real magnitude of the risk?[J]. Jessica K Dyson,Matthew D Rutter.  World Journal of Gastroenterology. 2012(29)



本文編號(hào)：2907510