發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 06:49

　　目的:探討非AIH炎癥在引發(fā)自身免疫性肝炎中發(fā)揮的作用。方法:（1）小鼠尾靜脈注射不同劑量的質(zhì)粒p CYP2D6,72 h后取小鼠肝組織,使用Western Blot方法檢測(cè)小鼠肝臟中人CYP2D6蛋白表達(dá)情況。（2）Ad或CCl4感染小鼠后,在第5、10、15天取血清,使用ALT試劑盒檢測(cè)血清ALT水平。（3）觀察CCl4注射次數(shù)不同引發(fā)的炎癥的特點(diǎn)。（4）Ad或CCl4感染小鼠后,在不同時(shí)間點(diǎn)取肝組織,提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后Real-time PCR檢測(cè)與炎癥有關(guān)的基因Tnfa,Il6,Il1b的表達(dá)。（5）尾靜脈注射質(zhì)粒p CYP2D6,并且尾靜脈注射Ad或腹腔注射CCl4構(gòu)建自身免疫性肝炎模型。（6）在Ad/p CYP2D6組和CCl4/p CYP2D6組,尾靜脈持續(xù)注射質(zhì)粒p CYP2D6,觀察是否誘發(fā)更加嚴(yán)重的自身免疫應(yīng)答和自身免疫性肝炎。（7）ELISA檢測(cè)不同處理組小鼠血清中抗CYP2D6抗體和抗肝蛋白抗體滴度。（8）肝組織切片HE染色,觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。（9）肝組織切片天狼星紅染色,觀察纖維化情況。結(jié)果:（1）不同劑量的質(zhì)粒p CYP2D6通過(guò)尾靜脈注射在肝組織中... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Ad和pCYP2D6的注射時(shí)間

pCYP2D6 的量 10、20、50、100、200 μg 分別和 Ad 注射小鼠，第 28 天檢測(cè)的血清抗體結(jié)果顯示，在小鼠體內(nèi)只注射 Ad 是沒(méi)有抗體產(chǎn)生的；只注射質(zhì)粒pCYP2D6 時(shí)，有抗 CYP2D6 抗體產(chǎn)生，滴度很低，但沒(méi)有抗肝蛋白抗體產(chǎn)生；當(dāng)質(zhì)粒 pCYP2D6 和腺病毒 Ad 共同處理小鼠時(shí)，可以看到既有抗 CYP2D6 抗體也有抗肝蛋白的抗體產(chǎn)生，與只注射質(zhì)粒 pCYP2D6 組產(chǎn)生的抗體有顯著差異10 、20、50 μg 質(zhì)粒的量分別與 Ad 處理小鼠產(chǎn)生的抗 CYP2D6 抗體和抗肝蛋白抗體滴度逐漸升高，50、100、200 μg 質(zhì)粒的量分別與 Ad 處理小鼠產(chǎn)生的抗CYP2D6 抗體和抗肝蛋白抗體滴度升高的幅度很�。▓D 1-2B）。由此可知不同劑量的模擬抗原和 Ad 誘發(fā)不同程度的自身免疫反應(yīng)。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ad 與模擬抗原共同處理小鼠時(shí)才能誘發(fā)自身免疫應(yīng)答，Ad 促進(jìn)了模擬抗原誘發(fā)自身免疫應(yīng)答。Ad 和人 CYP2D6 誘發(fā)自身免疫應(yīng)答與Ad 的存在以及 CYP2D6 表達(dá)量有關(guān)。模擬抗原可以不是病毒的成分。

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文2、模擬抗原持續(xù)表達(dá)加強(qiáng)自身免疫應(yīng)答Ad 和質(zhì)粒 pCYP2D6 誘發(fā)的自身免疫應(yīng)答有質(zhì)粒劑量依賴性，那么增加質(zhì)粒注射次數(shù)也就是模擬抗原持續(xù)表達(dá)會(huì)不會(huì)加強(qiáng)自身免疫應(yīng)答呢？為了探究該問(wèn)題，我們?cè)黾淤|(zhì)粒的注射次數(shù)，使模擬抗原持續(xù)表達(dá)，與模擬抗原不持續(xù)表達(dá)組比較，觀察兩組產(chǎn)生的抗體是否有差異。根據(jù)第一部分的結(jié)果 Ad 與 50、100、200 μg 質(zhì)粒 pCYP2D6 共同處理小鼠誘發(fā)自身免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體滴度基本無(wú)變化，所以我們選擇用質(zhì)粒 pCYP2D6 注射劑量是 50 μg。Ad 的劑量為1×109，尾靜脈注射，增加質(zhì)粒 pCYP2D6 注射次數(shù)，注射時(shí)間如圖 2-1，質(zhì)粒不持續(xù)注射組時(shí)間如圖 1-1，在第 49 天取血清檢測(cè)抗體滴度。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Auto immune hepatitis[J]. Nicole MF van Gerven,Ynto S de Boer,Chris JJ Mulder,Carin MJ van Nieuwkerk,Gerd Bouma.  World Journal of Gastroenterology. 2016(19)
[2]Juvenile autoimmune hepatitis: Spectrum of the disease[J]. Giuseppe Maggiore,Silvia Nastasio,Marco Sciveres.  World Journal of Hepatology. 2014(07)
[3]Hepatocellular carcinoma in patients with autoimmune hepatitis[J]. Andreas Teufel,Arndt Weinmann,Catherine Centner,Anja Piendl,Ansgar W Lohse,Peter R Galle,Stephan Kanzler.  World Journal of Gastroenterology. 2009(05)
[4]Aetiopathogenesis of autoimmune hepatitis[J]. Diego Vergani,Giorgina Mieli-Vergani.  World Journal of Gastroenterology. 2008(21)
[5]Low-dose tacrolimus ameliorates liver inflammation and fibrosis in steroid refractory autoimmune hepatitis[J]. Fin Stolze Larsen,Ben Vainer,Martin Eefsen,Peter Nissen Bjerring,Bent Adel Hansen.  World Journal of Gastroenterology. 2007(23)
[6]Hepatitis A vaccine associated with autoimmune hepatitis[J]. PA Berry,G Smith-Laing.  World Journal of Gastroenterology. 2007(15)



本文編號(hào)：2906471