目的:探討非AIH炎癥在引發(fā)自身免疫性肝炎中發(fā)揮的作用。方法:（1）小鼠尾靜脈注射不同劑量的質(zhì)粒p CYP2D6,72 h后取小鼠肝組織,使用Western Blot方法檢測小鼠肝臟中人CYP2D6蛋白表達情況。（2）Ad或CCl4感染小鼠后,在第5、10、15天取血清,使用ALT試劑盒檢測血清ALT水平。（3）觀察CCl4注射次數(shù)不同引發(fā)的炎癥的特點。（4）Ad或CCl4感染小鼠后,在不同時間點取肝組織,提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后Real-time PCR檢測與炎癥有關(guān)的基因Tnfa,Il6,Il1b的表達。（5）尾靜脈注射質(zhì)粒p CYP2D6,并且尾靜脈注射Ad或腹腔注射CCl4構(gòu)建自身免疫性肝炎模型。（6）在Ad/p CYP2D6組和CCl4/p CYP2D6組,尾靜脈持續(xù)注射質(zhì)粒p CYP2D6,觀察是否誘發(fā)更加嚴重的自身免疫應答和自身免疫性肝炎。（7）ELISA檢測不同處理組小鼠血清中抗CYP2D6抗體和抗肝蛋白抗體滴度。（8）肝組織切片HE染色,觀察炎癥細胞浸潤情況。（9）肝組織切片天狼星紅染色,觀察纖維化情況。結(jié)果:（1）不同劑量的質(zhì)粒p CYP2D6通過尾靜脈注射在肝組織中... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Ad和pCYP2D6的注射時間

pCYP2D6 的量 10、20、50、100、200 μg 分別和 Ad 注射小鼠，第 28 天檢測的血清抗體結(jié)果顯示，在小鼠體內(nèi)只注射 Ad 是沒有抗體產(chǎn)生的；只注射質(zhì)粒pCYP2D6 時，有抗 CYP2D6 抗體產(chǎn)生，滴度很低，但沒有抗肝蛋白抗體產(chǎn)生；當質(zhì)粒 pCYP2D6 和腺病毒 Ad 共同處理小鼠時，可以看到既有抗 CYP2D6 抗體也有抗肝蛋白的抗體產(chǎn)生，與只注射質(zhì)粒 pCYP2D6 組產(chǎn)生的抗體有顯著差異10 、20、50 μg 質(zhì)粒的量分別與 Ad 處理小鼠產(chǎn)生的抗 CYP2D6 抗體和抗肝蛋白抗體滴度逐漸升高，50、100、200 μg 質(zhì)粒的量分別與 Ad 處理小鼠產(chǎn)生的抗CYP2D6 抗體和抗肝蛋白抗體滴度升高的幅度很�。▓D 1-2B）。由此可知不同劑量的模擬抗原和 Ad 誘發(fā)不同程度的自身免疫反應。此實驗結(jié)果表明，Ad 與模擬抗原共同處理小鼠時才能誘發(fā)自身免疫應答，Ad 促進了模擬抗原誘發(fā)自身免疫應答。Ad 和人 CYP2D6 誘發(fā)自身免疫應答與Ad 的存在以及 CYP2D6 表達量有關(guān)。模擬抗原可以不是病毒的成分。

華 中 科 技 大 學 碩 士 學 位 論 文2、模擬抗原持續(xù)表達加強自身免疫應答Ad 和質(zhì)粒 pCYP2D6 誘發(fā)的自身免疫應答有質(zhì)粒劑量依賴性，那么增加質(zhì)粒注射次數(shù)也就是模擬抗原持續(xù)表達會不會加強自身免疫應答呢？為了探究該問題，我們增加質(zhì)粒的注射次數(shù)，使模擬抗原持續(xù)表達，與模擬抗原不持續(xù)表達組比較，觀察兩組產(chǎn)生的抗體是否有差異。根據(jù)第一部分的結(jié)果 Ad 與 50、100、200 μg 質(zhì)粒 pCYP2D6 共同處理小鼠誘發(fā)自身免疫應答產(chǎn)生的抗體滴度基本無變化，所以我們選擇用質(zhì)粒 pCYP2D6 注射劑量是 50 μg。Ad 的劑量為1×109，尾靜脈注射，增加質(zhì)粒 pCYP2D6 注射次數(shù)，注射時間如圖 2-1，質(zhì)粒不持續(xù)注射組時間如圖 1-1，在第 49 天取血清檢測抗體滴度。

【參考文獻】：
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本文編號：2906471