發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 01:20

　　目的非酒精性脂肪性肝�。╪onalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn),是我國最常見的慢性肝病之一。NAFLD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,很多環(huán)節(jié)尚未完全清楚,其主要病理改變是甘油三酯在肝細(xì)胞內(nèi)異常堆積。目前的研究提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress, ERS）參與了NAFLD的發(fā)生和發(fā)展過程,是NAFLD發(fā)病機(jī)制研究中的熱點(diǎn)問題。ERS對肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積的影響及其具體機(jī)制均有待進(jìn)一步研究。固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（Sterol regulatory element binding protein, SREBP）是與脂肪生成基因調(diào)節(jié)區(qū)的固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合的鋅脂蛋白,在維持體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡中起調(diào)控作用。其中,SREBP-1c是調(diào)節(jié)與肝臟脂肪合成有關(guān)的酶的活性和表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,促進(jìn)肝細(xì)胞脂肪酸合成代謝。固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白（SREBP cleavage-activating protein, SCAP）的主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)SREBP-1c至高爾基體進(jìn)行水解激活。胰島素誘導(dǎo)基因1（insulin induce... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?Ｌ０２和Ｈ巧Ｇ２肝細(xì)胞ＧＲＰ７８的ｍＲＮＡ和蛋白水平??＊：?Ｐ＜０．０５，與空白組比較，＃：?Ｐ＜０．０５，與巧組比較??

構(gòu)建的Ｉｎｓｉｇ－ｒ慢病毒過表達(dá)載體ＬＶ－５（ｐＬＶＥＦｌａ／ＧＦＰ＋Ｐｕｒｏ）中攜帶有ＧＦＰ?（綠??色巧光）基樹，轉(zhuǎn)染肝細(xì)胞后，倒置巧光顯微鏡下可見大量綠色巧光蛋白的表達(dá)??即轉(zhuǎn)染成功（見圖３．１－３．２）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測到Ｈ巧Ｇ２ＬＶ－５肝細(xì)胞的Ｉｎｓｉｇ－ｌ蛋??白表達(dá)，成功建立穩(wěn)定過表達(dá)Ｉｎｓｉｇ－１基內(nèi)的化ＰＧ２ＬＶ－５肝細(xì)胞株。??ｆ編ＭＭ??誦誦圓??圖３．１?Ｉｎｓｉｇ－ｌ過表達(dá)慢病毒的綠色巧光蛋白（ｘ２００）??Ａ：轉(zhuǎn)染后４８ｈ白光Ｂ：轉(zhuǎn)染后４８ｈ巧光Ｃ：轉(zhuǎn)染后９６ｈ白光化轉(zhuǎn)染后９化巧光??Ｆｉｇ．３．Ｉ?Ｔｈｅ?ｇｒｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｐｒｏ化ｉｎ?ｏｆ?ｌｎｓｉｇ－１?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?（ｘ２００）??Ａ：?Ｔｈｅ?ｗｈｈｅ?ｌｉｇｈｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?４８ｈ?Ｂ：?Ｔｈｅ?ｇｉ＊ｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?４８ｈ??Ｃ：?Ｔｈｅ?ｗｈｈｅ?ｌｉｇｈｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?９６ｈ?Ｄ：?Ｔｈｅ?ｇｒｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｆｉｇｕｒｅ?ｆｏｒ?９６ｈ??４５??

ＡＭＦＲ－ｌｓｉ民ＮＡ＋Ｔｇ姐與ＴＴｇ組相比較，Ｉｎｓｉｇ－ｌ蛋白表達(dá)顯著增多（Ｐ＜０．０５）；陰性對??照＋Ｔｇ組與Ｔｇ組相比無明顯變化Ｐ＞０．〇ｙ，說明干擾ＡＭＦＲ，ＥＲＳ狀態(tài)下巧細(xì)胞??Ｉｎｓｉｇ－ｌ蛋白水平上調(diào)。見表３．３，圖３．５。??表３．３各組肝細(xì)胞Ｉｎｓｉｇ－ｌ的相對ｍＲＮＡ和蛋白表達(dá)量（均數(shù)準(zhǔn)差，ｎ＝３）??Ｔａｂ．３．３?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｍＲＮＡ?ａｎｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅ邱ｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆ?Ｉｎｓ皆１?（ｍ兇ｎｓ±ＳＤ，?ｎ＝３）??空白對照組?Ｔｇ組?陰性對照＋?ＡＭＦＲ－ｌｓｉＲＮＡ＋??Ｔｇ組?Ｔｇ組??Ｌ０２?ｍＲＮＡ?ｌ．ＯｆｔｔＯ．ＯＯ?１．９６±０．２０＊?１．９２±０．２１，?１．８６±０．２３？??ｐｒｏｔｅｉｎ?０．６２±０．０６?０．２５±０．０４＊?０．２６±０．０４?０．４８±０．０５＊＊??ＨｅｐＧ２ＬＶ－５?ｍＲＮＡ?ｌ．ＯＯｉＯ．ＯＯ?１．７６±０．２１＊?１．７４±０．２０＊?１．８５±０．２：３，??ｐｒｏ?化化?Ｇ．８６±０．０７?０．３８±０．０６ｉ?０．３６±０．０５?０．６７：ｔ〇．０６ｂ??ａ：?Ｐ＜０．０５，與空白組比較ｂ：?Ｐ＜０．０５，與巧組相化??ａ：?Ｐ＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?化化ｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏ叩，ｂ：?Ｐ＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｉＨｏ?Ｔｇ?ｇｒｏｕｐ??４９??


本文編號：2896780