發(fā)布時間：2020-11-21 02:17

　　 目的: 研究門靜脈高壓癥(portal hypertension,PHT)脾靜脈組織局部血管緊張素II(angiotensin II ,AngII)及其受體表達水平。研究門靜脈高壓癥脾靜脈組織中絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)、核因子-κB (NF-κB)蛋白的表達。研究AngII以及MAPK、NF-κB與人門靜脈高壓癥脾靜脈血管平滑肌細胞(Splenic vein Vascular Smooth Muscle Cell,SvVSMC)增殖的關系。探討MAPK及NF-κB在AngII誘導的人門靜脈高壓癥SvVSMC增殖中的作用。 方法: PHT組為乙肝后肝硬化門靜脈高壓癥行脾切除加選擇性賁門周圍血管離斷術患者26例;對照組選取同期因外傷性脾破裂行脾切除術患者10例。放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)檢測脾靜脈中AngII水平;反轉錄聚合酶鏈式反應法(RT-PCR法)測定脾靜脈血管組織AT1-R及AT2-R mRNA的表達;免疫組織化學法和蛋白免疫印跡法(Western blot)測定NF-κB(p65)、ERK(p-erk42/44)、P38(phospho-p38)蛋白的表達。體外培養(yǎng)人門靜脈高壓癥SvVSMC,用WST-1法測定細胞增殖狀況。蛋白免疫印跡法(Western blot)測定人門靜脈高壓癥SvVSMC中NF-κB、ERK、P38蛋白的表達。 結果: 第一部分: PHT組脾靜脈組織AngII為248.91±48.31 ng/L,顯著高于對照組AngII為143.35±36.45 ng/L(P0.01)。免疫組化和蛋白免疫印跡均顯示PHT組脾靜脈NF-κB、P38、ERK蛋白的表達較對照組明顯增強。與對照組比較,PHT組脾靜脈AT1-R mRNA表達明顯降低(P0.01)。而AT2-R mRNA表達明顯增高(P0.01)。 第二部分: 1、低濃度AngII(10-8mol/L)促進SvVSMC增殖作用就較顯著(P0.05),隨著AngII濃度增高(10~(-7),10-6mol/L),細胞增殖顯著上升(P0.01)。 2、AngII誘導SvVSMC NF-κB蛋白表達,于30min達高峰;在10~(-8)-10~(-6)mol/L濃度范圍內(nèi),AngII以濃度依賴性方式增加人門靜脈高壓癥SvVSMC的NF-κB活化,當AngII濃度為10~(-7) mol/L時,SvVSMC中的NF-κB表達明顯增高,與對照組相比,差異具有極顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 3、AngII誘導SvVSMC ERK蛋白表達,于10min達高峰,在10~(-8)-10~(-6)mol/L濃度范圍內(nèi),AngII以濃度依賴性方式增加人門靜脈高壓癥SvVSMC的ERK活化,當AngII濃度為10~(-7) mol/L時,SvVSMC中的ERK表達明顯增高,與對照組相比,差異具有極顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 4、AngII誘導SvVSMC P38蛋白表達,于5min達高峰,在10~(-8)-10~(-6)mol/L濃度范圍內(nèi),AngII以濃度依賴性方式增加人PHT脾靜脈VSMC的P38活化,當AngII濃度為10~(-7) mol/L時,SvVSMC中的P38表達明顯增高,與對照組相比,差異具有極顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 5、NF-κB特異性阻斷劑PDTC(100umol/L)降低AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC NF-κB活性和細胞增殖,與單純AngII(10~(-7)mol/L)組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);與單純AngII(10~(-7)mol/L)組比較,ERK特異性阻斷劑PD98059(100umol/L)降低AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC ERK活性和細胞增殖,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);P38特異性阻斷劑SB202190(10~(-7) mol/L)降低AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC P38活性和細胞增殖,與單純AngII(10~(-7)mol/L)組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);JNK特異性阻斷劑SP600125(100umol/L)能降低AngII(10~(-7)mol/L)誘導的人PHT脾靜脈VSMC的細胞增殖,與單純AngII組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。PD98059、PDTC干預后AngII(10~(-7)mol/L)誘導SvVSMC WST-1活性與對照組相比無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05),而SB202190、SP600125干預后AngII誘導人PHT脾靜脈WST-1活性與對照組相比存在顯著差異(P0.05)。 6、PD98059(100umol/L)干預后AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC NF-κB活性與單純AngI(I10~(-7)mol/L)組比較顯著降低(P0.01);與單純AngI(I10~(-7)mol/L)組比較,SB202190(10~(-7) mol/L)干預后AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC P38活性顯著降低(P0.01);SP600125(100umol/L)干預后AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC NF-κB活性與單純AngII(10~(-7)mol/L)組比較顯著降低(P0.01);PDTC(100umol/L)干預后,AngII(10~(-7)mol/L)誘導的SvVSMC P38活性與單純AngII(10~(-7)mol/L)組比較顯著降低(P0.01)。 結論: 第一部分:1.門靜脈高壓癥脾靜脈血管存在LRAS的激活,提示LRAS的激活可能參與PHT時的脾靜脈血管病變的形成和發(fā)展。2.門靜脈高壓癥時脾靜脈血管NF-κB、ERK及P38活化可能與門靜脈脈高壓癥血管病變關系密切。3.門靜脈高壓癥時脾靜脈血管LRAS的激活可能是脾靜脈血管中NF-κB、ERK及P38活化的重要原因。 第二部分:1. AngII誘導SvVSMC中MAPK、NF-κB活化是促人PHT SvVSMC增殖的重要原因。2. ERK、NF-κB途徑是AngII誘導人PHT SvVSMC增殖的主要途徑。3. AngII誘導人PHT SvVSMC MAPK活化可以激活NF-κB。4. AngII誘導人PHT SvVSMC NF-κB活化可以激活P38. 5. AngII激活MAPK、NF-κB通路可能是門靜脈高壓癥血管病變發(fā)生發(fā)展的重要原因。
【學位單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

統(tǒng)計軟件包分析。組間比較采用多樣本均數(shù)的 One-wayANOVA 檢驗。兩組均數(shù)比較采用 t 檢驗。P<0.05 表示有顯著性差異；P<0.01 表示有極顯著性差異。結 果1. 形態(tài)學結果與對照組相比，PHT 組脾靜脈壁明顯增厚，管徑明顯增加，彈性減弱。對照組正常脾靜脈內(nèi)膜完整，內(nèi)皮細胞無破壞（圖 1）；PHT 組脾靜脈內(nèi)膜局灶性增厚，增厚的內(nèi)膜中可見遷移的平滑肌細胞，內(nèi)皮細胞不完整，中膜也顯著增厚（圖 2，圖 3）。2. 脾靜脈組織中 AngII 水平脾靜脈組織局部 AngII 水平比較顯示，PHT 組 AngII 為 248.91±48.31 ng/L，顯著高于對照組 143.35±36.45 ng/L，差異有極顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01,見圖 4）。

PHT組脾靜脈內(nèi)皮不完整，內(nèi)膜層增厚其中可見遷移的血管平滑肌細胞x800

PHT組脾靜脈中膜顯著增厚x800
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本文編號：2892366