發(fā)布時(shí)間：2019-01-06 12:14

【摘要】：目的：觀察不同濃度乙醇對(duì)H4-ⅡE細(xì)胞增殖抑制、酶的變化、脂質(zhì)代謝及細(xì)胞凋亡的影響,探討乙醇所致肝損傷的機(jī)制。 方法：選用大鼠H4-ⅡE細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),采用CCK-8法在不同濃度乙醇干預(yù)12h、24h、48h后,測(cè)定其對(duì)H4-ⅡE細(xì)胞的增殖抑制作用,分設(shè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,并進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；western bolt法檢測(cè)ADH、ALDH、AMPK、PPAR a、caspase3、caspase8、caspase、TNF-a在各組細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)；ELISA法檢測(cè)各組中ADH, ALDH的溢出量；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果： 1.CCK-8法：乙醇對(duì)H4-Ⅱ E細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用,且呈一定的劑量依賴性。 2.形態(tài)學(xué)：乙醇作用于H4-E細(xì)胞后呈現(xiàn)出典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。 3. western bolt法：①乙醇對(duì)大鼠H4-ⅡE細(xì)胞ADH、ALDH、AMPK、PPARa表達(dá)的影響：與對(duì)照組相比,0.05mol/L乙醇處理12h后表達(dá)無(wú)顯著改變(P0.05),余各乙醇組表達(dá)減少(P0.05)；②乙醇對(duì)大鼠H4-ⅡE細(xì)胞caspase3、caspase8、 caspase9、TNF-a表達(dá)的影響：與對(duì)照組相比,各濃度乙醇組表達(dá)增多(P0.05)。 4. ELISA法：①乙醇干預(yù)12h、24h：與對(duì)照組相比,各濃度乙醇組ADH、ALDH溢出量增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且隨著乙醇濃度增加,溢出量增多;②乙醇干預(yù)48h：與對(duì)照組相比,各濃度乙醇組ADH、ALDH溢出量增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);1.6mol/L乙醇組與1.2mol/L乙醇組比較,ADH、ALDH溢出量減少(P0.05)；③乙醇干預(yù)72h：與對(duì)照組相比,各濃度乙醇組ADH、ALDH溢出量增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；1.2、1.6mol/L乙醇組與1.Omol/L乙醇組比較,ADH溢出量減少(P0.05);1.2mol/L乙醇組與1.6mol/L乙醇組比較,ADH溢出量無(wú)顯著性差異(P0.05);1.2mol/L乙醇組與1. Omol/L乙醇組比較,ALDH溢出量無(wú)顯著性差異(P0.05);1.6mol/L乙醇組與1.2mol/L乙醇組比較,ALDH溢出量減少(P0.05)。其余各組間比較均有差別(P0.05),且隨著乙醇濃度的增加,ADH及ALDH的溢出量增多(P0.05)。 5.流式細(xì)胞術(shù)：乙醇組正�；罴�(xì)胞比例較對(duì)照組減少(P0.05),早期凋亡、晚期凋亡及死亡細(xì)胞細(xì)胞比例增多(P0.05)。細(xì)胞凋亡率隨乙醇濃度的升高呈增·高趨勢(shì)。 結(jié)論：1.乙醇誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡可能與ADH、ALDH代謝途徑異常有關(guān)。2.ADH、ALDH表達(dá)降低可下調(diào)肝細(xì)胞內(nèi)AMPK、PPARα表達(dá),致肝細(xì)胞損傷。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of different concentrations of ethanol on the inhibition of proliferation, changes of enzyme, lipid metabolism and apoptosis of H4- 鈪，

本文編號(hào)：2402776