目的：通過觀察不同濃度乙醇作用于大鼠H4-ⅡE細胞,探討乙醇對肝細胞脂質(zhì)代謝及其相關蛋白表達的影響。方法:1.細胞培養(yǎng)將一定量大鼠H4-ⅡE細胞移至潔凈培養(yǎng)瓶中,根據(jù)細胞密度加入適量DMEM培養(yǎng)液,于37℃,5% CO2培育箱中培養(yǎng)：2.MTT方法檢測細胞活性將梯度濃度乙醇作用于細胞,作用時間分別設立為24 h、48 h、72 h,選擇其中對細胞生長活性有一定影響的乙醇濃度作為實驗濃度(0.2、0,4、0.6 mmol/l),實驗時間設為24 h；3.細胞形態(tài)學觀察HE染色、油紅O染色、AnnexinV-FITC染色、免疫組化染色倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化；4.免疫組化方法觀察各實驗組細胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein Kinase, AMPK)及過氧化物酶體增值物激活受體(Peroxisome Proliferator-activated Receptora, PPARa)的表達情況：5.Elisa方法檢測梯度濃度乙醇作用細胞12 h、24 h、48 h、72 h后,各實驗組細胞培養(yǎng)上清中AMPK,乙酰輔酶A羧化酶(Acectyl-CoA-Carboxylase ,ACC),游離脂肪酸(Free fatty acid, FFA)以及肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1 (carnitine palmitoyl transferasel, CPT-1)的分泌量情況；6. Western blotting檢測各實驗組細胞內(nèi)P-AMPK、PPAR-α、P-ACC、CPT-I的表達,7.流式細胞術檢測各組細胞的凋亡情況。結(jié)果：1.MTT一定濃度的乙醇作用H4-ⅡE細胞后,對細胞的生長產(chǎn)生明顯的抑制作用,且與作用時間以及乙醇的濃度密切相關(P0.05)；2.細胞形態(tài)學觀察對照組細胞生長狀態(tài)良好,各乙醇實驗組細胞呈現(xiàn)出不同程度的凋亡形態(tài)學變化；3.免疫組化染色結(jié)果同對照組相比較,0.2,0.4、0.6 mol/1實驗組細胞AMPK、 PPARa的陽性表達率明顯下降；0.6 mol/1乙醇實驗組AMPK、PPAR-a陽性表達率低于0.4 mol/1組,0.4 mol/1實驗組AMPK、 PPAR-a陽性表達率低于0.2 mol/1組(P0.05)。4.Elisa結(jié)果在一定的乙醇濃度范圍及作用時間內(nèi),乙醇可增加H4-ⅡE細胞培養(yǎng)上清中ACC,FFA、AMPK及CPT-Ⅰ的泄漏量(P0.05)；其中當乙醇濃度在0.1-1.4 mol/1范圍內(nèi)時,各乙醇實驗組細胞AMPK及CPT-I的泄漏量隨著乙醇的濃度增長作用時間的延長而逐漸增加；而1.6 mol/1組AMPK、CPT-I泄漏量(作用時間48 h、72 h)低于1.4 mol/1組,呈現(xiàn)下降趨勢；5.Western blotting結(jié)果顯示同對照組相比較,各乙醇實驗組細胞P-AMPK、 P-ACC、PPARa及CPT-Ⅰ蛋白的表達量明顯下降；隨著乙醇濃度的增長,各組細胞P-AMPK、P-ACC. PPARa及CPT-Ⅰ蛋白的表達量逐漸下降(0.6 mol/1組0.4mol/1組0.2 mol/1組)(P0.05)。6.流式細胞術①同對照組相比較,各乙醇實驗組細胞的凋亡率明顯增加；且0.6mol/1組凋亡率0.4mol/1組0.2mol/1組(P0.05)；②同對照組相比較,各乙醇實驗組正�；罴毎麛�(shù)明顯減少,且0.6mol/1組0.4 mol/1組0.2mol/1組(P0.05)；⑧同對照組相比較,各乙醇實驗組凋亡細胞及死亡的細胞數(shù)顯著增多,且0.6mol/1組0.4 mol/1組0.2 mol/1組(P0.05)。結(jié)論：1.乙醇對肝細胞的生長有抑制作用,并可誘導肝細胞的凋亡。2.乙醇可引起肝細胞脂質(zhì)代謝紊亂,增加脂肪酸含量并抑制其氧化,其機制可能與AMPK等相關信號途徑有關。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李娟娟;凌文華;;AMPK與肥胖[J];國際內(nèi)科學雜志;2007年11期

2 劉文倩;艾華;;AMPK與肥胖和減肥關系研究進展[J];中國運動醫(yī)學雜志;2008年06期

3 蔡明春,黃慶愿,高鈺琪;AMPK與能量代謝[J];重慶醫(yī)學;2005年01期

4 葛斌;謝梅林;顧振綸;周文軒;郭次儀;;AMPK作為治療2型糖尿病新靶點的研究進展[J];中國藥理學通報;2008年05期

5 徐靜;劉毅;完強;賈振華;王榮;;高糖環(huán)境對大鼠腎小球系膜細胞AMPK表達及活性的影響[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2009年05期

6 宮克城;丁樹哲;;AMPK與2型糖尿病的關系及其在運動介導下的研究[J];遼寧體育科技;2009年03期

7 羅招凡;李芳萍;丁鶴林;程樺;;AMPKα2基因克隆及其野生型和突變型真核表達載體的構建[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年28期

8 丁曉潔;王佑民;王麗萍;;高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達及其活性的影響[J];安徽醫(yī)科大學學報;2009年06期

9 程媛;王佑民;丁曉潔;;肥胖大鼠骨骼肌AMPK表達及其與糖脂代謝的關系[J];安徽醫(yī)科大學學報;2010年02期

10 黃德強;羅凌玉;王麗麗;羅時文;呂農(nóng)華;羅志軍;;AMPK在胰島素信號轉(zhuǎn)導通路中的作用[J];中國細胞生物學學報;2011年11期

相關博士學位論文 前10條

1 陳雷;AMP激活的蛋白質(zhì)激酶（AMPK）調(diào)控機制的研究[D];清華大學;2010年

2 張秀娟;TSH調(diào)節(jié)肝臟HMG-CoA還原酶磷酸化修飾的研究[D];山東大學;2014年

3 趙順玉;消積飲聯(lián)合CIK通過AMPKα/Sp1/EZH2/DNMT1相關通路抗肺癌生長的作用機制[D];廣州中醫(yī)藥大學;2015年

4 王紅亮;AMPK-α在鹵蟲胚胎發(fā)育過程中對細胞有絲分裂調(diào)控的研究[D];浙江大學;2015年

5 周錫紅;三甲基甘氨酸通過AMPK途徑影響脂肪沉積的研究[D];浙江大學;2015年

6 朱莉;電鏡單顆粒技術研究全長AMPK蛋白的構架及變構效應[D];蘭州大學;2011年

7 符慶瑛;大腸桿菌雙雜交篩選AMPKα2相互作用蛋白[D];第三軍醫(yī)大學;2007年

8 鄧虎平;燙傷大鼠骨骼肌AMPK的活化對蛋白分解的作用及其信號轉(zhuǎn)導機制[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2010年

9 余冰;AMPK對應激狀態(tài)下仔豬脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2003年

10 梁俊芳;AMPKα亞基對小鼠骨骼肌生長發(fā)育及宰后糖酵解過程的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 柯志強;AMPK信號通路在白藜蘆醇改善高糖誘導乳鼠心肌細胞損傷中的作用[D];湖北科技學院;2015年

2 肖瑤;AMPK對低氧誘導血管生成作用的研究[D];湖北科技學院;2015年

3 王玉兵;HIF-1α、AMPK、E-cadherin在前列腺癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 魏蘇玉;乙醇對H4-ⅡE細胞脂質(zhì)代謝及AMPK表達的影響[D];延邊大學;2015年

5 陳婷;肌肉特異敲除AMPKα2對小鼠脂代謝的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

6 張二東;銅離子及模擬太空環(huán)境通過ROS/AMPK信號誘導人B淋巴母細胞凋亡[D];蘭州大學;2015年

7 徐英秀;硫化氫通過AMPK激活調(diào)控腦缺血后小膠質(zhì)細胞的極化狀態(tài)[D];蘇州大學;2015年

8 黃艷;AMPK和SIRT-1參與定時高脂飲食對小鼠肝臟生物鐘基因的影響研究[D];蘇州大學;2015年

9 楊霞;AMPK參與線粒體通路介導的氟致H9c2心肌細胞凋亡機制的研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

10 閆旭紅;胰島素對1型糖尿病大鼠睪丸脂聯(lián)素及其受體、AMPK、AKT和eNOS表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2015年

本文編號：2387616