發(fā)布時(shí)間：2018-06-02 12:39

  本文選題：Ezrin基因缺失 + 膽汁淤積　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2015年19期

【摘要】：目的建立Ezrin基因表達(dá)缺失的Hep G2細(xì)胞株,并研究其在膽汁淤積時(shí)對(duì)Hep G2細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多藥耐藥相關(guān)蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的影響。方法不同位點(diǎn)干擾的Ezrin-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,篩選Ezrin基因表達(dá)缺失的Hep G2細(xì)胞。分別提取細(xì)胞總蛋白和膜蛋白,檢測(cè)Ezrin基因表達(dá)缺失是否影響Hep G2細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP2的表達(dá)。結(jié)果 RT-q PCR結(jié)果證實(shí),Ezrin-shRNA#3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞后成功抑制了Ezrin基因表達(dá),抑制率為70%。蛋白免疫印跡表明,Ezrin基因表達(dá)缺失后,Hep G2細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP2表達(dá)增高,但與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。蛋白免疫共沉淀檢測(cè)生物素化MRP2膜蛋白表明,Ezrin基因表達(dá)缺失后,無(wú)論是胞漿中還是細(xì)胞膜上,MRP2膜蛋白均表達(dá)增高(P0.05)。結(jié)論 Ezrin基因表達(dá)缺失后能夠上調(diào)Hep G2細(xì)胞中MRP2膜蛋白,使其表達(dá)增高。
[Abstract]:Objective to establish a Hep G2 cell line with missing Ezrin gene expression and to study its effect on the bile acid transporter multidrug resistance associated protein 2(multidrug resistance-associated protein 2 MRP2in Hep G2 cells during cholestasis. Methods Hep G2 cells were transfected with Ezrin-shRNA plasmid with different site interference. Hep G2 cells with missing Ezrin gene expression were screened. Total protein and membrane protein were extracted, and the expression of bile acid transporter (MRP2) in Hep G2 cells was detected by Ezrin gene deletion. Results the results of RT-q PCR confirmed that the expression of Ezrin gene was inhibited successfully by Ezrin-shRNA #3 plasmid transfection into Hep G2 cells, and the inhibition rate was 70%. Western blot showed that the expression of bile acid transporter MRP2 in Hep G2 cells was increased after the deletion of Ezrin gene expression, but there was no significant difference compared with the control group (P 0.05). The detection of biotinylated MRP2 membrane protein by immunoprecipitation showed that the expression of MRP2 membrane protein increased in both cytoplasm and cell membrane after the deletion of Ezrin gene. Conclusion Ezrin gene expression can up-regulate and increase the expression of MRP2 membrane protein in Hep G2 cells.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍消化病研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81370560,81170430);國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(81100280)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R575.6

【共引文獻(xiàn)】

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