發(fā)布時間：2018-03-03 06:44

  本文選題：肝特異性表達(dá)　切入點：真核表達(dá)載體　出處：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為進(jìn)一步研究NPC1L1在代謝性疾病尤其是脂代謝紊亂中具體的分子機(jī)制,本研究以pEGFP-C1質(zhì)粒為模板,通過PCR擴(kuò)增出Neo~r/Kan~r基因片段,并對pLiv-11質(zhì)粒和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切,用T4DNA連接酶連接Neo~r/Kan~r、pLiv-11和h NPC1L1基因片段,最終構(gòu)建了含有表達(dá)質(zhì)粒的重組菌株JM109(pLiv-11-Neo~r/Kan~r-hNPC1L1)。酶切鑒定和序列分析結(jié)果表明,構(gòu)建的p Liv-11-Neo~r/Kan~r-hNPC1L1重組質(zhì)粒含有hNPC1L1(human Niemann-Pick C1 like 1)基因且基因序列和開放閱讀框架均正確。本研究成功構(gòu)建了肝特異性表達(dá)hNPC1L1的真核表達(dá)載體,為培育h NPC1L1表達(dá)轉(zhuǎn)基因巴馬小型豬奠定了一定基礎(chǔ),有利于闡釋NPC1L1的調(diào)控機(jī)制以及揭示肝脂肪代謝相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制。
[Abstract]:In order to further study the molecular mechanism of NPC1L1 in metabolic diseases, especially lipid metabolic disorders, the Neo~r/Kan~r gene fragment was amplified by PCR using pEGFP-C1 plasmid as template, and the pLiv-11 plasmid and PCR amplification product were digested by enzyme digestion. The recombinant strain JM109 pLiv-11-NeohNPC1L1 was constructed by using T4 DNA ligase to link Neohrr / KanrnrLiv-11 and hNPC1L1 gene fragments. The results of restriction endonuclease digestion and sequence analysis showed that the recombinant strain JM109pLiv-11-Neor-Kanr-hNPC1L1L1 was constructed. The constructed recombinant plasmid of p Liv-11-Neo~r/Kan~r-hNPC1L1 contains hNPC1L1(human Niemann-Pick C1 like 1) gene, and the gene sequence and open reading frame are correct. In this study, the eukaryotic expression vector for liver specific expression of hNPC1L1 was successfully constructed. It is helpful to explain the regulation mechanism of NPC1L1 and to reveal the pathogenesis of liver fat metabolism related diseases.
【作者單位】： 吉林化工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院;韶關(guān)學(xué)院英東生命科學(xué)院粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【基金】：國家科技支撐計劃(2011BA115B02)資助
【分類號】：Q78;R575

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本文編號：1559947