骨骼肌占成年動(dòng)物體重的40%～50%,是人體關(guān)鍵的發(fā)動(dòng)器官,是肌肉骨骼系統(tǒng)不可缺少的組成部分。骨骼肌具有較強(qiáng)的再生能力,肌肉干細(xì)胞在骨骼肌再生過(guò)程中起關(guān)鍵作用。肌肉干細(xì)胞又名肌肉衛(wèi)星細(xì)胞(satellite cells,SCs)在成年個(gè)體肌肉中位于肌纖維細(xì)胞膜和基膜之間,處于靜息態(tài)[1]。肌肉受損傷時(shí)SCs被激活進(jìn)入細(xì)胞周期,快速分裂產(chǎn)生大量成肌祖細(xì)胞(myogenic progenitor cells,MPCs),MPCs分化形成新的肌管完成受損肌肉的修復(fù)[2]。應(yīng)對(duì)輕微損傷(如肌肉拉傷,利器割傷等)肌肉干細(xì)胞在微環(huán)境(壞死肌纖維,胞外基質(zhì)、間質(zhì)細(xì)胞及生長(zhǎng)因子等成分構(gòu)成)調(diào)控下可以完成修復(fù),然而在肌肉嚴(yán)重缺損(如手術(shù)切除)即肌肉大體積缺失(volumetric muscle loss,VML)時(shí)卻不能完成修復(fù),以致形成大量的疤痕組織[3-8]。目前臨床對(duì)VML的傳統(tǒng)治療手段為自體移植和異體移植,這種方法不僅受免疫排斥和有限供體的限制且移植后受損肌肉幾乎不能恢復(fù)到損傷前水平[9-11]。因此尋找新VML治療手段及解析骨骼肌再生修復(fù)機(jī)制迫在眉睫。組織工程是一種單獨(dú)或組合運(yùn)用種子細(xì)胞、支架材...

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞
緒論
1 第一章 MPCs與骨骼肌ECM相互作用初步探究
    1.1 引言
    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        1.2.1 材料和試劑
        1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2.4 試劑配制
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 成肌祖細(xì)胞的分離
        1.3.2 脫細(xì)胞基質(zhì)制備
        1.3.3 H&E染色
        1.3.4 免疫熒光
        1.3.5 考馬斯亮藍(lán)染色(每步操作都在搖床上進(jìn)行)
        1.3.6 細(xì)胞凍存(除MPCs細(xì)胞外)
        1.3.7 成肌祖細(xì)胞(MPCs)細(xì)胞凍存
        1.3.8 細(xì)胞復(fù)蘇
        1.3.9 熒光實(shí)時(shí)定量PCR (Real time PCR)
        1.3.10 蛋白印跡
        1.3.11 掃描電鏡樣品制備方法:
        1.3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4.1 成肌祖細(xì)胞(myogenic progenitor cells,MPCs)分離
        1.4.2 MPCs純化
        1.4.3 MPCs鑒定及純度統(tǒng)計(jì)
        1.4.4 MPCs分化成肌能力檢測(cè)
        1.4.5 骨骼肌脫細(xì)胞支架的制備
        1.4.6 骨骼肌脫細(xì)胞支架表征
        1.4.7 骨骼肌脫細(xì)胞支架生物相容性
        1.4.8 MPCs能夠在骨骼肌脫細(xì)胞基質(zhì)上成肌分化
        1.4.9 構(gòu)建組織工程肌肉束
    1.5 討論
2 第二章小鼠骨骼肌快速貼壁細(xì)胞在成肌過(guò)程中的作用
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.2.1 材料和試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.4 試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 成肌祖細(xì)胞的分離(同第一章)
        2.3.2 免疫熒光(同第一章)
        2.3.3 成肌祖細(xì)胞(MPCs)細(xì)胞凍存(同第一章)
        2.3.4 細(xì)胞復(fù)蘇(同第一章)
        2.3.5 RNA提取(同第一章)
        2.3.6 RACs與MPCs 3D共培養(yǎng)
        2.3.7 Moveheat檢測(cè)骨骼肌類器官生理功能的原理
        2.3.8 透射電鏡樣本制備
        2.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(同第一章)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 構(gòu)建骨骼肌類器官
        2.4.2 RACs能夠促進(jìn)MPCs成肌
    2.5 討論
3 第三章 基于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)解析小鼠骨骼成肌過(guò)程中的細(xì)胞亞群及細(xì)胞間的聯(lián)系
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.1 材料和試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.4 試劑配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.0 從6-8w雄性C57小鼠肌肉中的離RACs和SACs(同第一章)
        3.3.1 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建
        3.3.2 細(xì)胞爬片免疫熒光
        3.3.3 細(xì)胞凍存(除MPCs細(xì)胞外)
        3.3.4 成肌祖細(xì)胞(MPCs)細(xì)胞凍存(同第二章)
        3.3.5 細(xì)胞復(fù)蘇(同第一章)
        3.3.6 RNA提取(同第一章)
        3.3.7 將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA(同第一章)
        3.3.8 透射電鏡樣本制備(同第二章)
        3.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(同第一章)。
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序解析RACs細(xì)胞亞型。
        3.4.2 RACs異質(zhì)性分析
        3.4.3 RACs與MPCs相互作用潛在關(guān)系計(jì)算
        3.4.4 RACs與MPCs配體-受體相互作用的GO (Gene Ontology)分析
        3.4.5 RACs對(duì)MPCs成肌的促進(jìn)作用
    3.5 討論
4 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4054675