發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 17:11

　　目的:通過將兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)、兔骨髓間充干細(xì)胞誘導(dǎo)分化形成的成骨細(xì)胞(osteoblast cells,OBs)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)體外共培養(yǎng),用低粘附培養(yǎng)法構(gòu)建預(yù)血管化三維細(xì)胞微球,為血管化組織工程骨的構(gòu)建提供一種新的策略。方法:(1)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離和培養(yǎng):采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、純化細(xì)胞,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、增殖情況,拍照記錄。(2)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞方向的誘導(dǎo)分化:將第2代的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞用含成骨誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)14天,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、增殖狀況,茜素紅染色鑒定成骨細(xì)胞。(3)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng):觀察細(xì)胞形態(tài)、增殖情況,拍照記錄。(4)BMSCs細(xì)胞微球的構(gòu)建:細(xì)胞懸液以1000個(gè)/孔、5000個(gè)/孔、10000個(gè)/孔、50000個(gè)/孔的接種密度接種在超低粘附96孔U型培養(yǎng)板中構(gòu)建BMSCs微球,接種后的第1,3,7天在顯微鏡下觀察并測(cè)量微球直徑大小... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs形態(tài)學(xué)觀察:（A）P0BMSCs貼壁細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，多角形，少量呈不規(guī)則形

BMSCs細(xì)胞懸液最初接種于超低粘附96孔板時(shí)，細(xì)胞散在分布，隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞自發(fā)聚集，24h內(nèi)細(xì)胞微球形成。形成細(xì)胞微球的直徑大小與細(xì)胞數(shù)量有關(guān)（圖2）。當(dāng)BMSCs接種密度為1000個(gè)/孔時(shí)，細(xì)胞微球的直徑為197.7±2.1μm；當(dāng)BMSCs接種密度為5000個(gè)/孔時(shí)，細(xì)胞微球直徑為338.8±3.3μm；當(dāng)BMSCs接種密度為10000個(gè)/孔時(shí)，細(xì)胞微球直徑為418.1±4.3μm；當(dāng)BMSCs接種密度為50000個(gè)/孔時(shí)，細(xì)胞微球直徑為

11765.7±2.8μm。細(xì)胞微球的大小與細(xì)胞接種數(shù)量有關(guān)，細(xì)胞接種數(shù)量越大，形成的細(xì)胞微球直徑越大（圖3）。圖 2 不同細(xì)胞數(shù)量的 BMSCs 接種于超低粘附培養(yǎng)板后 24h 形成的微球 (A)細(xì)胞數(shù)量為1000 個(gè)/孔 (B)細(xì)胞數(shù)量為 5000 個(gè)/孔 (C)細(xì)胞數(shù)量為 10000 個(gè)/孔 (D)細(xì)胞數(shù)量為 50000 個(gè)/孔(Scale bars=100μm)圖 3 不同細(xì)胞數(shù)量的 BMSCs 接種于超低粘附培養(yǎng)板 24h 形成微球的大小將以1000個(gè)/孔、5000個(gè)/孔、10000個(gè)/孔、50000個(gè)/孔的細(xì)胞接種數(shù)量形成的BMSCs微球繼續(xù)培養(yǎng)，在細(xì)胞接種后的第1，3，7天測(cè)量各組微球的大小，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果表明各組細(xì)胞微球的直徑均隨著時(shí)間的推移在第1，3，7天逐漸減小，P<0.05表示結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖4)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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