發(fā)布時間：2020-11-08 22:16

　　 背景:前期實驗制備了殼聚糖-硫酸化絲素蛋白人工血管。目的:通過犬股動脈置換殼聚糖-硫酸化絲素蛋白人工血管,探討組織工程血管的功效性能。方法:將8只比格犬隨機分為2組,實驗組于股動脈進行殼聚糖-硫酸化絲素蛋白人工血管置換;正常對照組不進行任何處理。置換后6個月,檢測凝血四項后,采用蘇木精-伊紅染色觀察血管結(jié)構(gòu),免疫組織化學(xué)觀察血管結(jié)構(gòu)形成,電鏡觀察血管內(nèi)皮層及血管層生成情況。結(jié)果與結(jié)論:1蘇木精-伊紅染色:實驗組血管形成了內(nèi)皮細胞層、平滑肌層和成纖維細胞層3層主要血管組織,在組織形態(tài)上與正常對照組血管無顯著差別;2免疫組織化學(xué)染色:實驗組FactorⅧ染色可見組織邊緣一深色帶染色即為內(nèi)皮層形成;á-SMA染色可見較多棕色顆粒沉淀,為血管平滑肌形成;Vimentin染色亦可見較多棕色顆粒沉淀,提示人工血管也形成了成纖維細胞層。該3層組織與正常對照組血管無明顯差異;3電鏡觀察:實驗組人工血管內(nèi)表面及切面與正常對照組血管相似,切面也形成了3層組織,但排列不及正常血管整齊;4凝血四項:兩組凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間、凝血酶時間、纖維蛋白原無差異;5結(jié)果表明:殼聚糖-硫酸化絲素蛋白人工血管具有較好的生物相容性及功效性能。
【部分圖文】：

0)孵育6h，PBS洗3次。常規(guī)染色，經(jīng)脫水、透明后石蠟包埋制片，在顯微鏡下分別觀察所取組織的內(nèi)皮細胞層、平滑肌層和成纖維圖1實驗組和正常對照組股動脈血管切面蘇木精-伊紅染色(×200)Figure1Hematoxylin-eosinstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)圖注：圖中A為正常對照組，B為實驗組。血管形成了內(nèi)皮細胞層、平滑肌層和成纖維細胞層3層主要血管組織，在組織形態(tài)上與對照組正常對照組組血管無明顯差別。AB正常對照組實驗組FactorⅧ染色á-SMA染色Vimentin染色圖2實驗組和正常對照組股動脈血管切面免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×200)Figure2Immunohistochemicalstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(x200)圖注：實驗組FactorⅧ染色可見組織邊緣一深色帶染色即為內(nèi)皮層形成；á-SMA染色可見較多棕色顆粒沉淀，提示血管平滑肌形成；Vimentin染色亦可見較多棕色顆粒沉淀，提示人工血管也形成了成纖維細胞層，該3層組織與正常對照組血管無明顯差異。正常對照組實驗組血管內(nèi)表面血管切面圖3實驗組和正常對照組股動脈內(nèi)表面和橫切面掃描電鏡拍照結(jié)果(×200)Figure3Electronmicroscopeobservationofthefemoralarteryinnersurfaceandcross-sectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)

血管連同吻合兩端血管的一小段剪下，分別放入含有2.5%戊二醛和40g/L多聚甲醛的混合固定液中，4℃固定4h左右。經(jīng)脫水、透明后石蠟包埋后制片，常規(guī)蘇木精-伊紅染色，在顯微鏡下觀察所取組織形態(tài)。血管免疫組織化學(xué)染色：置換后6個月，取兩組股動脈血管組織切片，PBS漂洗3次，血管內(nèi)皮第八因子(FactorⅧ）、á-肌動蛋白(á-SMA）和波形蛋白(Vimentin）一抗(1∶200)孵育過夜，PBS洗3次；二抗(1∶400)孵育6h，PBS洗3次。常規(guī)染色，經(jīng)脫水、透明后石蠟包埋制片，在顯微鏡下分別觀察所取組織的內(nèi)皮細胞層、平滑肌層和成纖維圖1實驗組和正常對照組股動脈血管切面蘇木精-伊紅染色(×200)Figure1Hematoxylin-eosinstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)圖注：圖中A為正常對照組，B為實驗組。血管形成了內(nèi)皮細胞層、平滑肌層和成纖維細胞層3層主要血管組織，在組織形態(tài)上與對照組正常對照組組血管無明顯差別。AB正常對照組實驗組FactorⅧ染色á-SMA染色Vimentin染色圖2實驗組和正常對照組股動脈血管切面免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×200)Figure2Immunohistochemicalstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(x200)圖注：實驗組FactorⅧ染色可見組織邊緣一深色帶染色即為內(nèi)皮層形成；á-SMA染色可見較多棕色顆粒沉淀，提示血管平滑肌形成；Vimentin染色亦可見較多棕色顆粒沉淀，提示人工血管也形成了成纖維細胞層，該3層組織與正常對照組血管無明顯差異。正常對照組實驗組血管內(nèi)表面血管切面圖3實驗組和正常對照組股動脈內(nèi)表面和橫切面掃描電鏡拍照結(jié)果(×200)Figure3Electronmicroscopeobservationofthefemoralarteryinnersurfaceandcross-sectionin

對照組實驗組FactorⅧ染色á-SMA染色Vimentin染色圖2實驗組和正常對照組股動脈血管切面免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×200)Figure2Immunohistochemicalstainingresultsofthefemoralarterysectionintheexperimentalandcontrolgroups(x200)圖注：實驗組FactorⅧ染色可見組織邊緣一深色帶染色即為內(nèi)皮層形成；á-SMA染色可見較多棕色顆粒沉淀，提示血管平滑肌形成；Vimentin染色亦可見較多棕色顆粒沉淀，提示人工血管也形成了成纖維細胞層，該3層組織與正常對照組血管無明顯差異。正常對照組實驗組血管內(nèi)表面血管切面圖3實驗組和正常對照組股動脈內(nèi)表面和橫切面掃描電鏡拍照結(jié)果(×200)Figure3Electronmicroscopeobservationofthefemoralarteryinnersurfaceandcross-sectionintheexperimentalandcontrolgroups(×200)
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