發(fā)布時間：2020-11-21 03:17

　　 目的:探討腎腦復(fù)元湯聯(lián)合NSCs移植對MCAO大鼠Caspase-3、Caspase-9的影響。方法:選用健康雄性清潔級SD大鼠200只,體重250±50g,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,采用線栓法制備大鼠大腦中動脈梗阻模型(MCAO),除假手術(shù)組(單純手術(shù)而未插線動物,灌胃等體積的蒸餾水)外,予造模成功后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組(行MCAO術(shù),灌胃等體積的蒸餾水)、中藥組(行MCAO術(shù),灌胃等體積腎腦復(fù)元湯)、聯(lián)合組(行MCAO術(shù),將1×105個胎鼠NSCs與5ul PBS液混懸后采用側(cè)腦室途徑注入缺血側(cè)側(cè)腦室,灌胃等體積腎腦復(fù)元湯),各組每個時間點(diǎn)保證成功6只實(shí)驗(yàn)動物,均在每天各灌胃1次,直到處死。以上四組分別于造模成功給藥后1d、3d、7d后處死取腦組織,通過TTC染色測定腦梗死面積,通過WB和免疫組化測定腦組織Caspase-3、Caspase-9表達(dá),并于造模后2h及處死前采用m-NSS進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分(各組評分3次,取平均值納入結(jié)果)。結(jié)果:1.神經(jīng)功能評分除假手術(shù)組外,各組神經(jīng)功能缺損評分在各時間點(diǎn)與治療前相比均有下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01)。中藥組、聯(lián)合組各時間點(diǎn)較模型組神經(jīng)功能缺損評分明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01。聯(lián)合組神經(jīng)功能缺損評分降低的幅度比中藥組更明顯(P0.01)。2.腦梗死面積百分比測定除假手術(shù)組外,各組腦梗死面積百分比前三天呈升高趨勢,三天后逐漸下降。同時間點(diǎn)比較:腦梗死面積百分比測定中藥組低于模型組(P0.05),聯(lián)合組低于模型組(P0.01),中藥組低于聯(lián)合組(P0.05)。3.免疫組化檢測結(jié)果顯示假手術(shù)組各時間點(diǎn)Caspase-3、Caspase-9表達(dá)顯著低于模型組(P0.01),說明造模對大鼠腦組織造成了損害。其余各組表達(dá)在1-3天呈上升趨勢,3-7d呈下降趨勢,其中第三天表達(dá)最高,考慮與梗死后繼發(fā)腦組織水腫有關(guān)。同時間點(diǎn)比較,中藥組均低于模型組(P0.01),聯(lián)合組均低于模型組(P0.01),聯(lián)合組均低于中藥組(P0.01)。說明中藥組與聯(lián)合組均能抑制Caspase-3、Caspase-9的表達(dá),其中聯(lián)合組的作用更明顯。4.WB檢測假手術(shù)組各時間點(diǎn)與模型組相比,僅表達(dá)少量Caspase-3、Caspase-9(P0.01),提示造模成功,MCAO術(shù)引起大鼠腦組織大量神經(jīng)元凋亡。其余各組在第三天出現(xiàn)表達(dá)峰值,前三天的上升趨勢和三天后的下降趨勢與免疫組化檢測結(jié)果總體相符。同時間點(diǎn)比較,中藥組、聯(lián)合組的表達(dá)均低于模型組(P0.01),中藥組聯(lián)合組相比,聯(lián)合組表達(dá)均更低(P0.01),說明腎腦復(fù)元湯及腎腦復(fù)元湯聯(lián)合NSCs移植均能抑制Caspase-3、Caspase-9的表達(dá),且二者聯(lián)用降低Caspase-3、Caspase-9的效果更好。結(jié)論:腎腦復(fù)元聯(lián)合NSCs移植治療可改善MCAO大鼠神經(jīng)功能缺損評分、減少M(fèi)CAO大鼠腦梗死體積,抑制腦梗死后MCAO大鼠Caspase-3、Caspase-9表達(dá),其效果優(yōu)于單用腎腦復(fù)元湯治療。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

可發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞沉積。1ml/100ul 槍頭輕輕吸除上清液。以 1ml 常溫 PBS 清洗細(xì)胞團(tuán)塊，清洗 3 次。加入形成單細(xì)胞懸液，吸取 10ul 加入血球板細(xì)胞計(jì)數(shù)，最終以孔板，置于 CO2 培養(yǎng)箱(CO2:空氣=5%:95%，相對濕度 10液一次。NSCs 的鑒定第 2 代 NSCs 球貼壁后進(jìn)行 Nestin 蛋白的免疫熒光檢測，結(jié)白 Nestin 表達(dá)呈強(qiáng)陽性，DAPI 細(xì)胞核染色呈藍(lán)色，熒光，證實(shí)該方法培養(yǎng)能夠培養(yǎng)出高純度 NSCs。見圖 1。

天達(dá)到最高值，隨后呈下降趨勢，這可能與腦同時間點(diǎn)組間比較，腦梗死體積聯(lián)合組＜中藥，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明腎腦復(fù)元湯能減少治療作用。且聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植治療比單純表 4 大鼠腦梗死體積比較（%，x例數(shù)梗死體積1d 3d 6 0.00±0.00** 0.00±0.00** 6 45.23±4.25 50.38±4.80 6 41.02±2.80*# 45.06±2.76*# 6 35.80±1.83** 39.04±2.19** 型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與聯(lián)合組比假手術(shù)組 模型組 中藥組 聯(lián)合組

ase-9：假手術(shù)組各時間點(diǎn)，對比模型組，僅表達(dá)少量 Caspase成功，MCAO 術(shù)后大鼠腦組織內(nèi)神經(jīng)元凋亡增多，使 Cas三組 Caspase-9 表達(dá)在第三天達(dá)到最高峰，考慮與梗死后繼關(guān)。同時間點(diǎn)組間比較聯(lián)合組＜中藥組＜模型組（P＜0.01合 NSCs 移植能降低腦梗死后大鼠腦組織內(nèi) Caspase-9 表達(dá)復(fù)元湯治療。表 5 免疫組化法檢測 Caspase-3 表達(dá)-3 假手術(shù)組 模型組 中藥組 0.18±0.01**0.59±0.04 0.39±0.03**##00.20±0.01**0.72±0.06 0.51±0.04**##00.19±0.01**0.47±0.04 0.32±0.02**##0型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與聯(lián)合組比較，#P＜0.05第 1 天 第 3 天 第 7
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2892439