人胚胎干細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化及神經(jīng)干細(xì)胞分泌的微囊泡對(duì)坐骨神經(jīng)缺損性損傷的修復(fù)作用研究
【學(xué)位單位】:江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類(lèi)】:R745
【部分圖文】:
邊緣清晰光滑(圖3.1A)。在神經(jīng)誘導(dǎo)液中培養(yǎng)約 18d 后,細(xì)胞開(kāi)始呈橢圓形、三角形、雙極型或三極型。當(dāng)達(dá)到 75%以上的融合度時(shí),消化細(xì)胞并重新接種在 Matrigel 培養(yǎng)皿,這些細(xì)胞可以傳代至少 50 代(目前還能繼續(xù)往下傳代),同時(shí)保持其特有的形態(tài)大致不變,并可反復(fù)凍存和復(fù)蘇(圖 3.1B-D)。通過(guò) PCR 和免疫熒光分析,檢測(cè) NSCs 標(biāo)志物的表達(dá)情況。與 hESCs 相比,Pax6、Sox 1 等神經(jīng)干細(xì)胞基因在 hESC-NSCs 中明顯上調(diào),而多能干性基因 Oct 4 表達(dá)下調(diào)(圖 3.1 E)。圖3.1:hESCs及hESC-NSCsA:生長(zhǎng)在matrigel上的hESCs形態(tài);B-D:P8
15分析顯示,hESC-NSCs細(xì)胞表面表達(dá)CD 44和CD 133,弱表達(dá)O1,而Neisin、β-IIItubulin和GFAP在hESC-NSCs的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)(圖3.2 C-D)。圖3.2:P8 hESC-NSCs神經(jīng)標(biāo)志物的表達(dá)及細(xì)胞定位A-B:hESC-NSCs的Nestin (A)和Pax6 (B)免疫熒光染色;C-D:P8 hESC-NSCs細(xì)胞膜表達(dá)Nestin, β-III tubulin, GFAP, O1, CD133 and CD44的分析(C);細(xì)胞內(nèi)表達(dá) Nestin, β-III tubulin,GFAP的分析(D)(A-B:Scale bars 50 μm)。Fig.3.2 Cellular localization of P8 hESC-NSCs markersA-B: hESC-NSCs were immunofluorescence staining for Nestin (A), Pax6 (B). C-D: Cellsmembrance analysis of Nestin
16這些hESC-NSCs可傳代50代,且形狀大致保持不變。我們使用P2、P8和P18hESC-NSCs來(lái)觀(guān)察Nestin、Pax6、Sox1、Sox2的表達(dá)(圖3.3A)。流式細(xì)胞儀分析顯示,Nestin、β-III tubulin、GFAP、O1、CD133在P2、P8和P18 hESC-NSCs中的表達(dá)(圖3.3B)。圖3.3 不同代數(shù)的hESC-NSCs上神經(jīng)標(biāo)志物的表達(dá)A:定量 PCR 分析 Nestin,Pax6,Sox1,Sox2 在 P8 hESC-NSCs,P18 hESC-NSCs 的表達(dá)水平,以 P2 hESC-NSCs 作對(duì)照(n=3,*p<0.05
【參考文獻(xiàn)】
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