發(fā)布時(shí)間：2020-11-17 20:50

　　 背景研究表明在皮膚惡性黑色素瘤中癌基因NRAS的突變率為9-15%,BRAF的突變率為60-66%,而在視網(wǎng)膜惡性黑色素瘤中卻沒(méi)有發(fā)現(xiàn)NRAS和BRAF基因的突變。在鼻腔惡性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因的突變率未見(jiàn)報(bào)道。本部分實(shí)驗(yàn)旨在研究鼻腔惡性黑色素瘤標(biāo)本中NRAS和BRAF的突變。 方法：提取12例鼻腔惡性黑色素瘤新鮮組織中的DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增后,進(jìn)行基因序列分析并與正常NRAS和BRAF基因序列比較。 結(jié)果：12例標(biāo)本中,未發(fā)現(xiàn)NRAS基因突變,8例標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)1例BRAF基因突變。 結(jié)論：鼻腔惡性黑色素瘤的NRAS和BRAF突變率遠(yuǎn)低于皮膚惡性黑色素瘤。 背景研究表明Ras-Raf-MAPKK-ERK信號(hào)通路的持續(xù)活化在皮膚惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,而這一信號(hào)通路的持續(xù)活化與NRAS和BRAF基因的高突變率有關(guān)。在前面的研究中,我們?cè)诒乔粣盒院谏�素瘤中未發(fā)現(xiàn)NRAS基因突變,BRAF基因的突變率也很低,那么在鼻腔惡性黑色素瘤中是否存在ERK的持續(xù)活化呢?本部分實(shí)驗(yàn)旨在研究鼻腔惡性黑色素瘤中持續(xù)活化的ERK。 方法：用Western蛋白印跡法檢測(cè)12例鼻腔惡性黑色素瘤標(biāo)本中活化的ERK。 結(jié)果：12例鼻腔惡性黑色素瘤標(biāo)本中,有8例表達(dá)活化的ERK,占66%。 結(jié)論：：ERK的持續(xù)活化是鼻腔惡性黑色素瘤的發(fā)病機(jī)制之 背景：研究表明ERK的持續(xù)活化在惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,ERK的激活對(duì)于Ras誘導(dǎo)的許多細(xì)胞反應(yīng)、許多轉(zhuǎn)錄因子(Elk1、cEts1、c-Ets2)的激活以及許多激酶(如p90rsk1、MNK1、MNK2)的激活是至關(guān)重要的。在惡性黑色素瘤中激活的ERK究竟參與了哪些細(xì)胞反應(yīng)還有待進(jìn)一步研究。本部分實(shí)驗(yàn)旨在研究ERK對(duì)細(xì)胞周期的影響及其機(jī)制。 方法：選用持續(xù)活化的ERK細(xì)胞株A-375,用MEK抑制劑PD98059阻斷ERK信號(hào)通路,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)曲線并用MTT法觀察細(xì)胞增殖,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,用Western蛋白印跡法檢測(cè)活化的ERK和細(xì)胞周期蛋白Cycline D1的表達(dá)。 結(jié)果：ERK信號(hào)通路阻斷后,G0-1期細(xì)胞所占比例明顯增加(p0.01),S期細(xì)胞所占比例明顯降低(p0.01),同時(shí)細(xì)胞周期蛋白Cyclin Dl無(wú)表達(dá)。 結(jié)論：ERK信號(hào)通路阻斷后,細(xì)胞阻滯于G0-1期。其機(jī)制與細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1的合成抑制有關(guān)。 背景：研究表明ERK的持續(xù)活化在惡性黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,同時(shí)有研究表明ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia AML)中起著一定的抗凋亡作用。而ERK信號(hào)通路是否在惡性黑色素瘤細(xì)胞中也有抗凋亡作用尚無(wú)報(bào)道。本部分實(shí)驗(yàn)旨在探索活化的ERK信號(hào)通路在惡性黑色素瘤細(xì)胞中的抗凋亡作用。 方法：用惡性黑色素瘤細(xì)胞A-375分別在含血清、含血清加PD98059、無(wú)血清、無(wú)血清加PD98059培液中培養(yǎng),用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率,并用熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞,比較各組細(xì)胞間凋亡差異。 結(jié)果：ERK通路激活時(shí),無(wú)血清組與含血清組細(xì)胞凋亡無(wú)顯著性差異,ERK通路阻斷后,含血清組與無(wú)血清組細(xì)胞凋亡有顯著性差異。 結(jié)論：ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在惡性黑色素瘤細(xì)胞中有一定的抗凋亡作用。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類(lèi)】：R739.5
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 鼻腔惡性黑色素瘤中NRAS和BRAF基因突變研究
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 鼻腔惡性黑色素瘤中持續(xù)活化的ERK酶檢測(cè)
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 ERK信號(hào)通路阻斷后惡性黑色素瘤細(xì)胞周期的變化
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 ERK信號(hào)通路在惡性黑色素瘤細(xì)胞中的抗凋亡作用
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    參考文獻(xiàn)
全文小結(jié)
綜述
    參考文獻(xiàn)
己發(fā)表文章
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation in mammalian cells[J];Cell Research;2002年01期

本文編號(hào)：2887900