發(fā)布時間：2025-01-04 08:05

　　目的從臨床、分子、細胞水平上探討肝細胞內FFA的沉積對肝臟胰島素抵抗的作用,為2型糖尿病的診治提供新的思路。方法1.收集病例:本研究選擇2016年12月至2017年11月期間在南通大學附屬醫(yī)院內分泌科住院的2型糖尿病患者,年齡30歲至70歲。按照排除標準去除不合適病例后,根據(jù)腰圍分為腹型肥胖組(病例組)和非腹型肥胖組(對照組)兩組。收集資料包括患者基本資料、臨床檢驗檢查資料、既往病史及生活習慣資料。分析腹型肥胖與糖尿病的相關性。2.建立細胞模型:在不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,加入0.25mM棕櫚酸(PA)刺激HepG2細胞24h。采用免疫共沉淀(IP)檢測Prdx1與GRP78之間的相互作用,利用免疫熒光了解細胞內共定位;以Flag-Prdx1質粒、Flag質粒轉染HepG2細胞,然后給予PA刺激,通過IP檢測Flag-Prdx1與GRP78之間的相互作用。用Flag-Prdx1、Flag、si-Prdx1、si-CON轉染細胞,通過Werstern blot和qRT-PCR檢測p-AKT、p-GSK3β、GRP78、p-IRE1α、PEPCK、G6Pase表達水平,通過葡萄糖比色/...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1GRP78直接與Prdx1發(fā)生相互作用A:免疫沉淀實驗中，將HepG2細胞裂解蛋白分為三份，一份作為Input，一份加入Prdx1抗體，另一份加入IgG抗體，在westenblot（WB）實驗中，給予抗Prdx1和GRP78抗體檢測相關蛋白表達

18圖1GRP78直接與Prdx1發(fā)生相互作用A:免疫沉淀實驗中，將HepG2細胞裂解蛋白分為三份，一份作為Input，一份加Prdx1抗體，另一份加入IgG抗體，在westenblot（WB）實驗中，給予抗Prdx1GRP78抗體檢測相關蛋白表....

圖2抑制Prdx1阻斷ERS和肝臟IRA:westernblot實驗展示了三種不同干擾位點的siRNAs在HepG2細胞中對Prdx1的干擾效率

20圖2抑制Prdx1阻斷ERS和肝臟IRA:westernblot實驗展示了三種不同干擾位點的siRNAs在HepG2細胞中對Prd的干擾效率。B:Prdx1被干擾后該蛋白表達水平的量化圖。C-D:HepG2細胞轉Prdx1siRNA#....

圖3Prdx1對胰島素抵抗的HepG2細胞脂質代謝、葡萄糖攝取和葡萄糖生成的影響

22圖3Prdx1對胰島素抵抗的HepG2細胞脂質代謝、葡萄糖攝取和葡萄糖生成的影A:油紅O染色法測定肝細胞脂質積累:CON組、PA組、PA+Flag組、PA+Flag-Prdx1PA+si-CON組、PA+si-Prdx1組。B：用葡萄糖熒光測定試劑盒顯....

本文編號：4023154