目的:探討"紅色復(fù)合體"牙周致病菌裂解液對(duì)人牙周膜細(xì)胞成骨分化能力的影響。方法:收集因正畸需要而拔除的健康前磨牙,原代培養(yǎng)人牙周膜干細(xì)胞(hPDLCs);采用免疫熒光方法和成骨分化誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)的原代hPDLCs進(jìn)行鑒定;體外聯(lián)合培養(yǎng)牙齦卟啉單胞菌、齒垢密螺旋體和福賽斯坦納菌,建立"紅色復(fù)合體"模型,掃描電鏡對(duì)其進(jìn)行鑒定;制備"紅色復(fù)合體"裂解液,通過(guò)堿性磷酸酶試劑盒、實(shí)時(shí)定量PCR、茜素紅染色,檢測(cè)裂解液對(duì)hPDLCs堿性磷酸酶活性,成骨分化相關(guān)基因表達(dá)的影響;以及對(duì)hPDLCs成骨礦化能力的影響。結(jié)果:在"紅色復(fù)合體"裂解液的刺激下,hPDLCs堿性磷酸酶活性,成骨分化相關(guān)基因ALP、Runx2、OPN、COL1的表達(dá)以及成骨礦化水平顯著降低。結(jié)論:"紅色復(fù)合體"牙周致病菌能夠抑制hPDLCs的成骨分化能力。

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圖1 hPDLCs的原代培養(yǎng)及鑒定

為了研究“紅色復(fù)合體”細(xì)菌裂解液對(duì)hPDLCs成骨分化特性的影響,本文檢測(cè)了hPDLCs的ALP活性的變化。與未成骨誘導(dǎo)的細(xì)胞(1.00±0.11)相比,經(jīng)成骨誘導(dǎo)的hPDLCs(陽(yáng)性對(duì)照組)在誘導(dǎo)的第14天,ALP活性顯著增高(12.15±0.55)。與此陽(yáng)性對(duì)照組相比較,細(xì)菌....

圖2 “紅色復(fù)合體”致病菌掃描電鏡圖

圖1hPDLCs的原代培養(yǎng)及鑒定表2“紅色復(fù)合體”細(xì)菌裂解液對(duì)hPDLCs成骨分化相關(guān)基因表達(dá)的影響Tab.2Effectsofbacterialextractsobtainedfrom“RedComplex”pathogensontheexpres....

圖3 紅色復(fù)合體”細(xì)菌裂解液對(duì)hPDLCs成骨礦化水平的影響

hPDLCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)21d后,經(jīng)茜素紅染色可見(jiàn)大量紅色礦化結(jié)節(jié)。與陽(yáng)性對(duì)照組相比較,在細(xì)菌裂解液(100mg/L)刺激下,hPDLCs形成礦化結(jié)節(jié)的數(shù)量顯著降低(圖3)。礦化洗脫液半定量分析表明,與單純成骨誘導(dǎo)組相比較,在細(xì)菌裂解液刺激下,細(xì)胞的成骨礦化能力降低了34.37....

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