發(fā)布時間：2024-06-05 05:56

　　目的：探討外源Aβ，及大腦病理性增加Aβ（AD模擬）對核受體RXRα、Nur77的表達和亞細胞定位的影響，RXRα、Nur77表達和亞細胞定位對神經(jīng)元凋亡的影響。 方法：以用Aβ25-35和ddH2O分別處理的N2a細胞，AD小鼠與對照小鼠的大腦皮層和海馬為研究對象。PCR結合免疫組化方法鑒定AD小鼠是否模擬成功。首先，在基因水平上應用實時熒光RT-PCR方法檢測N2a細胞和皮層、海馬中RXRα、Nur77的mRNA表達水平。第二，在蛋白含量水平上應用核質分離結合蛋白印記方法檢測RXRα、Nur77蛋白總含量以及在細胞核與細胞質中的含量。第三，在蛋白定位上應用免疫熒光對細胞爬片和大腦冰凍組織切片進行定位染色，觀察N2a細胞與皮層、海馬細胞中RXRα、Nur77的亞細胞定位；最后，細胞凋亡的檢測，流式細胞儀檢測N2a細胞凋亡情況，DAPI染色觀察皮層、海馬細胞的凋亡。 結果：N2a細胞經(jīng)Aβ處理24h后，RXRαmRNA表達水平增加了16.47%，Nur77mRNA表達水平無明顯變化；RXRα、Nur77總蛋白量變化無明顯差異，但RXRα、Nur77在細胞質中的含量與分布增多，RXRα與...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2大腦皮層與海馬免疫組化染色結果

圖2大腦皮層與海馬免疫組化染色結果熒光定量PCR檢測RXRα/Nur77的mRNA轉錄水平熒光RT-PCR方法檢測Aβ25-35短肽處理后的N2a細胞，AD馬組織中RXRα與Nur77基因表達水平的變化。結果顯示，A的N2a細胞對比于未處....

圖3熒光PCR擴增曲線A：細胞RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴增曲線；B：大腦皮層組織RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴增曲線；C：海馬組織RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴增曲線

23圖3熒光PCR擴增曲線A：細胞RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴增曲：大腦皮層組織RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴增曲線；C：海馬組織Rur77與GAPDH基因熒光PCR擴增曲線。AB

圖4引物對的溶解曲線A：RXRα溶解曲線B：Nur77溶解曲線C：GAPDH溶解曲線

圖4引物對的溶解曲線A：RXRα溶解曲線B：Nur77溶解曲線C：GAPDH溶解曲線3.4RXRα與Nur77蛋白的WesternBlot實驗結果利用WesternBlotting實驗方法對N2a細胞和Aβ25-35處理的N2a細胞....

圖5RXRα與Nur77蛋白的總蛋白含量A：N2a細胞Aβ25-35(-)與N2a細胞

海馬的增加了2.58%，Nur77蛋白含量增加了3.53%，蛋白含量無明顯變化，據(jù)單樣本t檢驗得出P>0.05，統(tǒng)計差別無意義。如圖6所示。AB

本文編號：3989750