發(fā)布時(shí)間：2020-11-15 09:28

　　 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC),是來(lái)源于胚胎早期中胚層的一類多能成體干細(xì)胞。絕大多數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如顱腦創(chuàng)傷(traumatic brain injury,TBI),脊髓損傷、腦卒中、神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,主要的發(fā)病原因或發(fā)病機(jī)理為神經(jīng)細(xì)胞的變性、凋亡、損傷或死亡。神經(jīng)細(xì)胞的及時(shí)、有效的補(bǔ)充對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的預(yù)防和治療尤為重要。當(dāng)前基礎(chǔ)和臨床研究均顯示,MSC具有向神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞分化的潛能,可以向受損的神經(jīng)組織中遷移、歸巢、生存、增殖和向神經(jīng)細(xì)胞分化成為神經(jīng)樣細(xì)胞,為TBI的治療提供“種子細(xì)胞”,從而改善患者的神經(jīng)系統(tǒng)功能,改善患者生存狀態(tài)和預(yù)后。因MSC本身免疫原性極低,在神經(jīng)系統(tǒng)可視為免疫豁免,因此其可作為一種理想的“種子細(xì)胞”干預(yù)TBI,提高患者的生存質(zhì)量。臍帶來(lái)源廣、變廢為寶,本研究所選擇的MSC為人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)。本研究的目的是為了探討hUC-MSCs移植治療TBI的療效、作用機(jī)制、安全性以及蛋白質(zhì)組學(xué)變化情況,為hUC-MSCs臨床治療TBI提供理論支持和臨床經(jīng)驗(yàn)。本研究中將45只雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組:對(duì)照組、TBI模型組以及TBI干細(xì)胞治療組,每組15只,利用電子大腦皮質(zhì)挫傷撞擊儀建立TBI大鼠模型,TBI干細(xì)胞治療組大鼠經(jīng)尾靜脈給予0.1ml hUC-MSCs懸液和0.1ml生理鹽水,對(duì)照組及TBI模型組給予0.2ml生理鹽水,利用PCR、Western Blot、免疫組化以及ELISA檢測(cè),分別檢測(cè)腦組織中和血清中白細(xì)胞介素-12(interleukin-12,IL-12)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的表達(dá)情況,并進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)TBI干細(xì)胞治療組腦組織中IL-12 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào),SOD mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào),血清中IL-12濃度顯著降低,免疫組化結(jié)果也證實(shí)了腦組織中SOD表達(dá)水平上調(diào)。為了驗(yàn)證hUC-MSCs移植治療TBI的療效、細(xì)胞移植方式和安全性,本研究通過(guò)回顧性分析原武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)重癥科自2015年4月至2015年11月收治的24例重型TBI患者的臨床資料,分為常規(guī)治療組和hUC-MSCs治療組,比較常規(guī)治療組與hUC-MSCs治療組患者性別、年齡、致傷原因等基本臨床資料,比較兩組患者入院時(shí)、傷后1個(gè)月及3個(gè)月GCS評(píng)分,比較兩組患者住院時(shí)間及傷后6個(gè)月GOS評(píng)分,觀察hUC-MSCs治療組不良反應(yīng)事件,發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs治療組在傷后3個(gè)月GCS評(píng)分、傷后6個(gè)月GOS評(píng)分以及住院時(shí)間均顯著優(yōu)于常規(guī)治療組,移植治療期間以及后期的隨訪過(guò)程中,無(wú)明顯不良事件發(fā)生。為了更深層次探討hUC-MSCs治療急性TBI的分子機(jī)制,本研究采用數(shù)據(jù)非依賴采集技術(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,對(duì)經(jīng)hUC-MSCs治療前后的腦脊液進(jìn)行生物信息學(xué)處理,經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的定量多肽以及子離子篩選,本實(shí)驗(yàn)共鑒定到722個(gè)蛋白,其中對(duì)633個(gè)蛋白進(jìn)行了可靠的定量分析,篩選到hUC-MSCs治療前后發(fā)生改變的42種差異蛋白,其中上調(diào)蛋白有29種,下調(diào)的蛋白有13種,主要包括白介素(IL-6、IL-12)、神經(jīng)穿透素、過(guò)氧化物酶、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等。對(duì)篩選到的差異蛋白進(jìn)行GO分析、KEGG Pathway分析、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖分析以及聚類分析,發(fā)現(xiàn)這些差異蛋白的改變主要表現(xiàn)在對(duì)應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)、免疫調(diào)節(jié)、軸突重塑以及血管重建方面。經(jīng)本實(shí)驗(yàn)研究證明:hUC-MSCs移植后,通過(guò)下調(diào)IL-12,控制炎癥反應(yīng);同時(shí)通過(guò)上調(diào)SOD,有效的抑制氧化應(yīng)激反應(yīng),減少對(duì)受損腦組織的二次傷害;hUC-MSCs移植治療重型TBI,可改善患者預(yù)后,縮短住院時(shí)間;多次、多途徑、序貫式的hUC-MSCs移植治療TBI是一種行之有效且安全性高的治療方法;hUC-MSCs移植治療TBI的作用機(jī)理可能為改善應(yīng)激反應(yīng)、進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)、改善機(jī)體微環(huán)境、促進(jìn)軸突再生重塑以及血管再生重建;通過(guò)細(xì)胞替代治療與“偽旁觀者作用”共同發(fā)揮作用,在一定程度上修復(fù)損傷腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu),同時(shí)通過(guò)旁分泌或自分泌作用分泌具有生物活性的物質(zhì),促進(jìn)恢復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)功能。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R651.15
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、hUC-MSCs移植對(duì)急性TBI大鼠超氧化物歧化酶及白細(xì)胞介素-12 的影響
    1.1 材料與方法
        1.1.1 hUC-MSCs的分離、培養(yǎng)及質(zhì)量控制
        1.1.2 TBI模型的建立
        1.1.3 干預(yù)及檢測(cè)
        1.1.4 RT-PCR檢測(cè)腦組織中IL-12及SOD的 mRNA的變化
        1.1.5 Western Blot檢測(cè)腦組織中IL-12及SOD蛋白的變化
        1.1.6 免疫組化
        1.1.7 血清IL-12 的測(cè)定
        1.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 IL-12及SOD mRNA的表達(dá)情況
        1.2.2 IL-12及SOD蛋白水平的表達(dá)情況
        1.2.3 各組腦組織SOD表達(dá)的差異情況（免疫組化）
        1.2.4 各組血清中IL-12 濃度差異情況（ELISA檢測(cè)）
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、hUC-MSCs移植治療急性TBI的臨床研究
    2.1 資料與方法
        2.1.1 臨床資料
        2.1.2 治療方法
        2.1.3 hUC-MSCs的分離、培養(yǎng)、質(zhì)量控制和移植
        2.1.4 觀察指標(biāo)
        2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 hUC-MSCs形態(tài)觀察
        2.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)hUC-MSCs單細(xì)胞懸液表面標(biāo)志物
        2.2.3 兩組患者基本臨床資料對(duì)比
        2.2.4 兩組患者治療后GCS評(píng)分及GOS評(píng)分對(duì)比
        2.2.5 兩組患者住院時(shí)間對(duì)比以及不良反應(yīng)事件
        2.2.6 典型病例
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、TBI患者經(jīng)hUC-MSCs治療后腦脊液蛋白組學(xué)的變化
    3.1 對(duì)象和方法
        3.1.1 樣本信息
        3.1.2 樣本分組及處理
        3.1.3 CSF蛋白提取與處理
        3.1.4 液相-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）檢測(cè)
        3.1.5 DDA數(shù)據(jù)采集——數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建
        3.1.6 DIA數(shù)據(jù)采集——定量數(shù)據(jù)采集
        3.1.7 DIA定量分析
        3.1.8 主要數(shù)據(jù)指標(biāo)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 譜圖庫(kù)構(gòu)建
        3.2.2 數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        3.2.3 定量多肽與子離子挑選
        3.2.4 定量分析
        3.2.5 GO分析
        3.2.6 KEGG分析
        3.2.7 蛋白之間的相互作用
        3.2.8 聚類分析
        3.2.9 差異蛋白表達(dá)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞研究與應(yīng)用進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

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