目的:通過誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)體外定向分化心肌細(xì)胞(iPSC derived cardiomyocytes,i PSC-CM)的方法建立酒精性心肌病的電生理研究模型。方法:體外擴(kuò)增培養(yǎng)人源iPSC并定向誘導(dǎo)其分化為i PSC-CM。實(shí)驗(yàn)將iPSC-CM分為空白對照組、酒精實(shí)驗(yàn)組和KN93干預(yù)組。通過免疫熒光法檢測iPSC-CM的分化情況,采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8,CCK8)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力檢測試劑盒檢測i PSC-CM的功能,使用實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析儀(real time cellular analysis,RTCA)監(jiān)測iPSC-CM電活動(dòng)的變化,采用線粒體膜電位熒光探針JC-1染色聯(lián)合RTCA分析儀觀察酒精對iPSC-CM的損傷而進(jìn)一步驗(yàn)證模型。結(jié)果:與空白對照組(0 mg/mL酒精)相比,不同劑量(25,50,100,150,200,250,300 mmol/L)的酒精實(shí)驗(yàn)組能抑制iPSCCM的增殖,并呈劑量依賴性,差異均有統(tǒng)...

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【部分圖文】：

圖1 免疫熒光染色鑒定i PSC及iPSC-CM

此外，通過1.2.2中的方法分化獲得的iPSC-CM可強(qiáng)陽性地表達(dá)心肌特異性標(biāo)志物TNNT2和MLC2a(圖1B)。光鏡下，iPSC-CM可自發(fā)地呈片狀、波浪樣跳動(dòng)，并可明顯觀察到肌絲肌節(jié)結(jié)構(gòu)，提示已成功分化出有電生理節(jié)律的iPSC-CM。2.2基于iPSC-CM建立的酒....

圖2 基于i PSC-CM建立酒精性心肌病模型

與酒精實(shí)驗(yàn)組相比，KN93干預(yù)組可引起LDH釋放量降低，JC-1標(biāo)記的紅綠熒光比值上調(diào)，均證實(shí)KN93可恢復(fù)酒精對iPSC-CM的損傷(圖4)，該模型可用于分子機(jī)制研究。圖3酒精引起iPSC-CM壞死性凋亡

圖3 酒精引起i PSC-CM壞死性凋亡

圖2基于iPSC-CM建立酒精性心肌病模型圖4KN93可減輕酒精引起的iPSC-CM損傷

圖4 KN93可減輕酒精引起的iPSC-CM損傷

圖3酒精引起iPSC-CM壞死性凋亡2.5模型應(yīng)用于電生理功能研究

本文編號：4045577