目的：Notch信號通路是一高度保守的信號轉導途徑,廣泛表達于淋巴細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞及組織細胞等,γ-分泌酶抑制劑(GSI)是Notch信號通路的有效阻滯劑。本研究通過研究Notch信號通路中Notch1受體及其下游靶基因Hes1在慢性阻塞性肺疾病(簡稱慢阻肺)肺泡巨噬細胞(AM)上的表達,及血清及支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞介素(IL)-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α分泌,探討Notch信號通路在慢阻肺炎癥中的作用。方法：SPF級BALB/c雄性小鼠80只,隨機分為健康對照組,健康GSI組,慢阻肺組、慢阻肺GSI組。采用單純香煙煙霧法建立慢阻肺小鼠模型；采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-PCR)法測定AM Notch1、Hes1的mRNA表達量；采用蛋白印跡(Western blot)法測定AM中Notch1、Hes1的蛋白含量；采用酶聯(lián)免疫吸附實驗測定血清及BALF中IL-6和TNF-α的的含量。結果：(1)單純香煙煙霧暴露90天成功建立小鼠慢阻肺模型。慢阻肺組小鼠吸氣峰流速和呼氣峰流速分別為(6.82±0.46)ml/s、(3.87±0.44)ml/s明顯低于健康對照組(9.84±0.46)ml/s、(7.96±0.52)ml/s,(P0.01、0.05)；肺組織病理,光鏡下可見慢阻肺組小鼠肺組織明顯的支氣管炎癥和肺氣腫改變。(2)AM中Notch1與Hes1 mRNA表達：慢阻肺組AM中Notch1 mRNA的相對表達量(1.45±0.16)較健康對照組(0.64±0.16)、健康GSI組(0.55±0.28)明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。慢阻肺GSI組AM中Notch1 mRNA的相對表達量(0.72±0.37)較慢阻肺組(1.45±0.16)表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。慢阻肺組AM中Hes1 mRNA的相對表達量(2.24±0.33)較健康對照組(1.03±0.26)、健康GSI組(1.14±0.27)明顯增加,差異有顯著統(tǒng)計學意義(均P0.01)。慢阻肺GSI組AM中Hes1 mRNA的相對表達量(1.244±0.32)較慢阻肺組(2.244±0.33)表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。(3)AM中Notch1與Hes1蛋白測定：慢阻肺組AM中Notch1蛋白的相對含量(1.96±0.07)較健康對照組(1.05±0.07)、健康GSI組(1.09±0.04)明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。慢阻肺GSI組AM中Notch1蛋白的相對含量(1.11±0.03)較慢阻肺組(1.96±0.07)表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。慢阻肺組AM中Hes1蛋白的相對含量(1.30±0.02)較健康對照組(0.93±0.06)、健康GSI組(0.90±0.06)明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.01)。慢阻肺GSI組AM中Hesl蛋白的相對含量(1.11±0.04)較慢阻肺組(1.30±0.02)表達減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4) BALF及血清中IL-6、TNF-α含量測定：①慢阻肺組、慢阻肺GSI組小鼠BALF中IL-6 (81.84±2.06、58.36±1.90)pg/ml較健康對照組、健康GSI組(30.82±2.01、29.24±1.40)pg/ml增多,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)；慢阻肺GSI組較慢阻肺組減少,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。慢阻肺組、慢阻肺GSI組小鼠血清中IL-6(98.36±2.18、67.23±2.40)pg/ml較健康對照組、健康GSI組(39.08±1.81、37.94±3.12)pg/ml增多,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)；慢阻肺GSI組較慢阻肺組減少,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。②慢阻肺組、慢阻肺GSI組小鼠BALF中TNF-α(63.04±3.84、43.86±2.63)pg/ml較健康對照組、健康GSI組(24.84±1.56、23.71±1.79)pg/ml增多,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)；慢阻肺GSI組較慢阻肺組減少,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。慢阻肺組、慢阻肺GSI組小鼠血清中TNF-α(69.35±2.94、52.77±2.66) pg/ml較健康對照組、健康GSI組(20.38±1.93、19.69±1.43)pg/ml增多,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)；慢阻肺GSI組較慢阻肺組減少,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。(5)相關性分析：①慢阻肺組小鼠AM中Notch1 mRNA的相對表達量與血清中IL-6的水平呈正相關,r=0.871,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.850,P0.01。Notch1蛋白與血清中IL-6的水平呈正相關,r==0.874,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.819,P0.01。慢阻肺組小鼠AM中Hes1mRNA的相對表達量與血清中IL-6的水平呈正相關,r=0.825,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.948,P0.01。Hes1蛋白含量與血清中IL-6的水平呈正相關,r=0.814,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.726,P0.05。②慢阻肺組小鼠AM中Notch1 mRNA的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關,r==0.828,P0.01；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.872,P0.01。Notch1蛋白的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關,r=0.928,P0.01；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.847,P0.01。慢阻肺組小鼠AM中HeslmRNA的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關r==0.877,P0.01；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.855,P0.01。Hesl蛋白的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關,r=0.801,P0.01；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.714,P0.05。③慢阻肺GSI組小鼠AM中Notch1 mRNA的相對表達量與血清中IL-6的水平呈正相關,r=0.879,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.819,P0.01。Notch1蛋白與血清中IL-6的水平呈正相關r=0.786,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.919,P0.01。慢阻肺GSI組小鼠AM中Hes1mRNA的相對表達量與血清中IL-6的水平呈正相關,r=0.887,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.805,P0.01。Hes1蛋白含量與血清中IL-6的水平呈正相關,r=0.905,P0.01；與BALF中IL-6的水平呈正相關,r=0.910,P0.01。④慢阻肺GSI組小鼠AM中Notch1 mRNA的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關,r=0.708,P0.05；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.723,P0.05。Notch1蛋白的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關,r=0.814,P0.01；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.795,P0.01。慢阻肺GSI組小鼠AM中Hes1 mRNA的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關r=0.707,P0.05；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.764,P0.05。Hesl蛋白的相對表達量與血清中TNF-α的水平呈正相關,r=0.744,P0.05；與BALF中TNF-α的水平呈正相關,r=0.801,P0.01。結論：單純香煙煙霧暴露法可以成功建立小鼠慢阻肺模型；慢阻肺小鼠肺組織局部與全身均存在炎癥反應；Notch信號通路可能調控AM參與肺組織局部和全身炎癥反應；GSI能部分抑制]Notch1/Hes1及其下游細胞因子水平,Notch1/Hes1通路參與慢阻肺的炎癥反應。
【學位單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R563.9
【文章目錄】：中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
結果
討論
結論
參考文獻
在學期間的研究成果
英文縮略詞表
致謝
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本文編號：
2873356
