發(fā)布時(shí)間：2020-11-04 23:16

　　 革蘭氏陰性菌感染是引起急性肺損傷的臨床常見病因,革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)與體內(nèi)相應(yīng)受體結(jié)合后,在肺內(nèi)啟動(dòng)多種信號(hào)級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng),導(dǎo)致前炎因子、炎癥介質(zhì)、化學(xué)趨化因子、黏附分子等產(chǎn)生和釋放。炎癥因子大量釋放入血,誘發(fā)炎癥瀑布級(jí)聯(lián)效應(yīng),導(dǎo)致炎癥繼續(xù)發(fā)展和放大；但在上述過程中,同時(shí)有抗炎介質(zhì)如白細(xì)胞介素10(interleukin-10, IL-10)等的合成和釋放,它們之間構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),調(diào)控炎癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。而IL-10在其中發(fā)揮著重要的病理生理學(xué)作用。 IL-10是一種具有抗炎作用的細(xì)胞因子,其主要生物活性表現(xiàn)為直接抑制炎癥細(xì)胞活化,進(jìn)而抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生。適時(shí)的、適度的IL-10的產(chǎn)生可以調(diào)節(jié)炎癥的程度,并保護(hù)正常組織免受炎癥損傷,在機(jī)體對(duì)抗感染的過程中發(fā)揮重要的保護(hù)性作用。肺泡巨噬細(xì)胞(Alveolar Macrophage)是肺內(nèi)重要的免疫防御細(xì)胞,具有趨化、吞噬和殺菌作用,是炎癥反應(yīng)中炎癥因子及IL-10的重要來源細(xì)胞。 Clara細(xì)胞是指襯覆于遠(yuǎn)端細(xì)支氣管的非纖毛上皮細(xì)胞,其分泌蛋白(Clara cell secretory protein, CCSP,又稱CC1O)屬于子宮珠蛋白(uteroglobin,UG)家族；子宮珠蛋白是一種進(jìn)化過程中高度保守的分泌性多功能非類固醇類激素蛋白,具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤抑制及刺激胚胎生長的作用。AF-1 (Antiflammin-1, AF-1)是來源于子宮珠蛋白C末端第三個(gè)α螺旋的九肽,已有的研究證明AF-1具有明顯的抗炎作用。但關(guān)于AF-1的抗炎作用是否與IL-10有關(guān)卻未見報(bào)道。 目的： 1.觀察AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10分泌及表達(dá)的影響。 2.檢測(cè)巨噬細(xì)胞子宮珠蛋白結(jié)合蛋白(uteroglobin-binding protein, UGBP)的表達(dá)。 3.探討UGBP在介導(dǎo)AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10分泌及表達(dá)影響中的作用,初步揭示AF-1的抗炎機(jī)制,為急性肺損傷的治療提供新的線索和思路。 方法： 1.應(yīng)用ELISA和RT-PCR法分別檢測(cè)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-10蛋白含量和細(xì)胞IL-10mRNA表達(dá),觀察AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10表達(dá)的影響。 2.應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)及RT-PCR法檢測(cè)UGBP在巨噬細(xì)胞的表達(dá)。 3.通過應(yīng)用抗-UGBP抗體預(yù)處理巨噬細(xì)胞,觀察抗-UGBP多抗對(duì)于AF-1引起的LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10分泌及表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.LPS可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和表達(dá)增加。AF-1對(duì)正常巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá)無影響,但可有效促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá),并具有一定的時(shí)間、劑量依賴性。 2.免疫熒光及RT-PCR實(shí)驗(yàn)均證實(shí)在巨噬細(xì)胞上有UGBP的表達(dá)。 3.抗-UGBP抗體預(yù)處理可抑制AF-1促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌及mRNA表達(dá)增加的作用。 結(jié)論： 1.AF-1對(duì)正常巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá)無影響,但可有效促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá),并具有一定的時(shí)間、劑量依賴性,提示AF-1抗炎作用的產(chǎn)生與調(diào)節(jié)IL-10的分泌和mRNA表達(dá)有關(guān)。 2.本實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)巨噬細(xì)胞上有UGBP的表達(dá)。 3.本實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)AF-1促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌及mRNA表達(dá)的效應(yīng)有賴于UGBP的介導(dǎo)。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R563
【部分圖文】：

總R獄在1.2%瓊脂糖凝膠電泳圖

LPS作用不同時(shí)間對(duì)巨噬細(xì)胞IL10mRNA表達(dá)的影響

4加bp.困曰IL-10367bPGAPDH580bPIL10367bpGAPDH580bPMarkCrohZh4hsh12h24h圖6LPS作用不同時(shí)間對(duì)巨噬細(xì)胞IL10mRNA表達(dá)的影響上圖是對(duì)照組，下圖是LPS組
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 翁翠蓮;汪建新;;白介素-10對(duì)內(nèi)毒素性肺損傷保護(hù)作用[J];國際呼吸雜志;2006年10期

2 許兵;劉少華;馬可;徐鑫榮;;吸入一氧化碳對(duì)內(nèi)毒素性急性肺損傷大鼠肺組織TNF-α和IL-10表達(dá)的影響及意義[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年08期

3 林棟棟,孫家邦,李非,張淑文,崔葉青,劉大川,朱斌,孫海晨,劉爽;IL-8、IL-10在大鼠急性胰腺炎并發(fā)肺損傷中的作用[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

4 張君嵐,劉艷梅,王殿華,凌亦凌,黃善生;IL-10抗內(nèi)毒素氣管內(nèi)滴注致急性肺損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國病理生理雜志;2000年04期

5 李錦華,余學(xué)清,陳永雄,張仕光;白細(xì)胞介素10基因轉(zhuǎn)移抑制腎小球系膜細(xì)胞誘生炎癥細(xì)胞因子[J];中國病理生理雜志;1999年04期

6 李曉玫,戴振華,唐嘉薇,王海燕;白細(xì)胞介素10抑制腎系膜細(xì)胞磷脂酶A_2及其介導(dǎo)的前列腺素E_2釋放的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;1999年04期

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1 李金鳳;AF-1對(duì)于內(nèi)毒素誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2870753