發(fā)布時間：2020-12-14 05:43

　　目的:反復呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection RRTI）是兒童期常見病,其發(fā)病與多種因素有關(guān),而免疫功能狀態(tài)尤受關(guān)注。近年固有免疫系統(tǒng)中的免疫分子L-ficolin與RRTI的關(guān)系研究日益增多。L-ficolin是脊椎動物和無脊椎動物體內(nèi)廣泛存在的寡聚蛋白,有調(diào)理素作用,它包括一個膠原樣結(jié)構(gòu)域和一個纖維素樣結(jié)構(gòu)域（fibrinogen-like domain,FBG）。通過纖維素樣結(jié)構(gòu)域L-ficolin可以和革蘭氏陽性及陰性細菌[如化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、鼠傷寒沙門氏菌、大腸埃希桿菌]等含有N-乙酰葡糖胺（N-acetylglucosamine GlcNAc）糖配基的微生物結(jié)合,激活MBL-相關(guān)絲氨酸蛋白酶-1、2（MBL-Associated Serine Proteases MASP-1,2）,經(jīng)過甘露聚糖結(jié)合凝集素（mannan binding lectin MBL）途徑激活補體系統(tǒng),最終消滅病原體,是人體抵御感染第一道防線中的重要免疫分子。編碼L-ficolin的基因（Ficolin 2 gene FCN2）位于9q34染... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Ficolin和MBL結(jié)構(gòu)示意圖

51.2.2.1 堿基淬滅探針技術(shù)：堿基淬滅探針技術(shù)的設(shè)計方案見圖2。探針5’或3’末端標記熒光基團6-羧基熒光素(6-carboxyfluorescein, FAM)。FAM標記在5’端時，探針3’端需用磷酸基團封閉（表2）。當PCR結(jié)束時，由于堿基淬滅探針與靶DNA序列在較低溫度條件下（如30oC）雜交，F(xiàn)AM發(fā)出的熒光被鄰近的堿基（A,T,C或G）淬滅（圖2a）；當溫度緩慢升高時，探針融解脫離靶DNA，從而導致熒光突然大量增加（圖2b）。熒光增量變化最大時的溫度即為解鏈溫度（melting temperature TM）。靶序列基因未發(fā)生突變（野生型），與探針完全結(jié)合，解離時所需溫度較高（TM值較大）；靶序列基因發(fā)生突變（突變型），與探針結(jié)合欠緊密，解離時所需溫度較低（TM值較�。�

值較大）；靶序列基因發(fā)生突變（突變型），與探針結(jié)合欠緊密，解離時所需溫度較低（TM值較�。�，因此突變型基因的TM值與野生型基因的TM值明顯不同，由此將不同基因型區(qū)分開來。根據(jù)溫度-實際熒光增量變化值所繪圖如圖3，該圖不能形象的反應上述變化，于是我們采用熒光強度對溫度的一次負倒數(shù)[-d(F1)/dT]圖 2 堿基淬滅探針技術(shù)檢測 SNP 原理圖光熒溫度圖 3 溫度-熒光增量變化圖


本文編號：2915924