發(fā)布時(shí)間：2024-04-28 05:21

　　丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）是引起慢性肝病的主要病原體，目前全球約有1.7億HCV感染者。由于HCV的高度變異性，至今尚無(wú)特異有效的疫苗和治療藥物，因而其感染已成為全球性的嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。 自1989年首次分離和鑒定出HCV至今，對(duì)HCV的防治研究一直進(jìn)展緩慢。其原因主要是由于HCV感染高度嚴(yán)格的種屬嗜性導(dǎo)致有效、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的缺乏。這不僅嚴(yán)重阻礙了對(duì)HCV感染和致病機(jī)制的研究，而且也極大地限制了抗病毒藥物和疫苗的開(kāi)發(fā)。 HCV基因組RNA編碼的NS3/4A蛋白具有絲氨酸蛋白酶和解旋酶活性。體外實(shí)驗(yàn)研究表明，HCV NS3/4A蛋白在蛋白前體的加工成熟、RNA復(fù)制以及病毒裝配等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。因此，NS3/4A蛋白已成為目前抗HCV藥物研發(fā)中最為重要的靶點(diǎn)之一。不僅如此，NS3/4A絲氨酸蛋白酶靶向作用于感染細(xì)胞內(nèi)非病毒復(fù)制相關(guān)的宿主蛋白，通過(guò)阻礙干擾素合成信號(hào)的傳遞等介導(dǎo)病毒的免疫逃逸與感染慢性化。這提示，靶向NS3/4A絲氨酸蛋白酶的抑制劑可能具備阻斷感染細(xì)胞內(nèi)病毒的復(fù)制和恢復(fù)感染細(xì)胞內(nèi)固有免疫防御應(yīng)答的雙重作用。 為了進(jìn)一步在動(dòng)物...

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1質(zhì)粒pTet-On示意圖

正文構(gòu)建Tet-On和Cre/LoxP系統(tǒng)雙表達(dá)HCVNS3/4A蛋白的真核表控系統(tǒng)質(zhì)粒pTet-On及pBI-G由德國(guó)海德堡大；重組質(zhì)粒pBluescript-ⅡSK-LoxP-FLuc-BGHA及pBI-G//Cre由本課題組趙亞博士、....

圖1-2質(zhì)粒pBI-G示意圖

圖1-2質(zhì)粒pBI-G示意圖Fig.1-2RestrictionmapofplasmidpBI-G胞系菌（E.coli）HB101株由本室保存。由本室保存。主要工具酶及相關(guān)試劑收試劑盒、質(zhì)粒小量提取試劑盒等購(gòu)自天根公提取、純化試劑盒購(gòu)自Promega公司....

圖1-3pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3/4A的構(gòu)建示意圖

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文，得到pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3n系統(tǒng)單獨(dú)調(diào)控時(shí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生含F(xiàn)luc編碼序列的mRCre/LoxP系統(tǒng)調(diào)控時(shí)，Cre重組酶特異性剪接Lo動(dòng)子啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄后產(chǎn)生的mRNA包含NS3/A蛋白....

圖1-4重組質(zhì)粒pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3/4A的酶切鑒定

質(zhì)粒pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3/4AedigestionanalysisofpBI--G//LoxP-FLuc-BGHPoly5000DNAMarker；M1：500~12000DNAwiderange....

本文編號(hào)：3966225