目的觀察組蛋白去甲基化酶抑制劑反苯環(huán)丙胺(tranylcypromine,TCP)對CD4+T細(xì)胞Th1/Th2分化的影響,分析賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1(Lysine-specific demethylase1, LSD1)在其中的作用,探討TCP在調(diào)控Th1/Th2分化平衡中的作用及機(jī)制。 方法1.收集并分離22例健康人外周血單核細(xì)胞,免疫磁珠法純化CD4+T細(xì)胞,經(jīng)抗CD3單抗聯(lián)合抗CD28單抗刺激活化后,加入不同濃度TCP(10、30、50、80、100nM)作用,用CFSE法檢測細(xì)胞增殖能力：Annexin/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率：CD4-PerCP-Cy5.5/IFN-γ-FITC/IL-4-PE三色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4的表達(dá)情況；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RQ-PCR)檢測不同濃度TCP對CD4+T細(xì)胞IFN-γ、IL-4、T-bet mRNA表達(dá)的影響；ELISA檢測IFN-γ的含量；Western blot觀察T-bet、STAT1、pSTATl蛋白表達(dá)情況。向極化培養(yǎng)的Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞中...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 課題來源、研究的目的和意義
    1.2 國內(nèi)外研究概況
        1.2.1 國外研究概況
        1.2.2 國內(nèi)研究概況
    1.3 論文的主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 研究資料及儀器設(shè)備
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要儀器與試劑
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)流程與方法
第三章 結(jié)果
    3.1 TCP對CD4⁺T細(xì)胞增殖的影響
        3.1.1 細(xì)胞分選后的純度與活性
            3.1.1.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測分選前后的細(xì)胞純度
            3.1.1.2 臺盼藍(lán)排斥試驗(yàn)檢測分選前后的細(xì)胞活性
        3.1.2 CFSE試驗(yàn)檢測TCP對CD4⁺T細(xì)胞增殖的影響
    3.2 TCP對CD4⁺T細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 不同濃度TCP對Th1/Th2分化的影響
    3.4 TCP對CD4⁺T細(xì)胞IFN-γ、IL-4 mRNA表達(dá)的影響
    3.5 ELISA檢測培養(yǎng)上清中IFN-γ的水平
    3.6 TCP對T-bet/STAT1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
        3.6.1 TCP對Thl型特異轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA表達(dá)的影響
        3.6.2 TCP對T-bet、STAT1、pSTAT1蛋白表達(dá)的影響
        3.6.3 TCP對極化培養(yǎng)Th細(xì)胞的STAT1、pSTAT1表達(dá)的影響
    3.7 LSD1對Th細(xì)胞分化的影響
        3.7.1 TCP對LSD1作用的影響
        3.7.2 轉(zhuǎn)染LSD1shRNA干擾LSD1的表達(dá)
        3.7.3 降低LSD1活性或干擾LSD1表達(dá)對Th1特異性細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄調(diào)控子表達(dá)的影響
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮寫詞表
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文與參加的項(xiàng)目
    A：在國內(nèi)外刊物上發(fā)表的論文
    B：所參加的項(xiàng)目
致謝



本文編號：3922874