第 1 章  緒論

卵子排出過(guò)程鎘中毒會(huì)造成其外排作用終止并引起短暫性不育，目前認(rèn)為鎘通過(guò)對(duì)雌性動(dòng)物雌激素合成、子宮、卵巢和卵母細(xì)胞的毒性作用諸如導(dǎo)致卵巢血管壁增厚，卵巢體積縮小、變性，卵泡不完全發(fā)育或畸形生長(zhǎng)；子宮壁增厚，卵子生長(zhǎng)障礙，降低輸卵管內(nèi)卵子數(shù)等影響雌性動(dòng)物生殖。鎘不容易透過(guò)生物體胎盤屏障，這在一定程度上減少鎘通過(guò)母體接觸胎兒的幾率、降低了鎘對(duì)胎兒的影響。透過(guò)胎盤屏障的鎘對(duì)胚胎體的生長(zhǎng)和發(fā)育會(huì)造成十分大的危害。Zhang 等[37]研究鎘對(duì) wistar 大鼠生殖系統(tǒng)的影響，在連續(xù) 6 周對(duì) Wistar 大鼠注射不同劑量鎘發(fā)現(xiàn) 1.0 mg/L  鎘能引起大鼠雌性生殖器孕酮和雌二醇含量下降，同時(shí)影響相關(guān)雌激素基因的表達(dá)。Zhang 等[38]利用氯化鎘探討了鎘對(duì)雌性生殖器激素黃體素的毒性作用機(jī)理，結(jié)果顯示污染物脅迫可抑制合成類固醇的多種調(diào)控蛋白相關(guān)的酶活性和調(diào)控因子的表達(dá)，影響大鼠卵巢孕酮激素的合成，隨著鎘暴露劑量的增加暈酮含量明顯下降。

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第 2 章  材料與方法 

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

健康清潔級(jí) 6-8 周齡雄性 SD 大鼠 35 只，重量 230±10g。實(shí)驗(yàn)大鼠購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司（SCXK(遼)2010-0001）。實(shí)驗(yàn)在專用動(dòng)物飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)，，室溫 25℃左右，相對(duì)濕度 60%-70%，光照 12-12h 明暗交替，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物均自由進(jìn)食飲水。 

2.2 研究方法

市售上海楊百利公司楊梅汁按照 2：1（重量體積比）加入 0.5%三氟乙酸（TFA）的甲醇溶液低溫浸提 24h。離心收集甲醇溶液。重復(fù)上述步驟三次。38℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除掉甲醇獲得花色苷粗提濃縮液。該濃縮液用乙酸乙酯 1:1（體積比）液液萃取三次獲得花色苷粗品�；ㄉ沾制愤^(guò)大孔樹脂 D101 柱去除糖類、脂類物質(zhì)。用 20 倍柱體積 0.5%TFA 溶液淋洗過(guò)濾糖、酸等干擾物質(zhì)，然后采用 0.5%TFA 的甲醇溶液洗脫，得到純度較高的花色苷混合物。 

第 2 章  材料與方法................ 20 

2.1 實(shí)驗(yàn)材料 ...................... 20
2.2  研究方法 ....... 22
2.3  觀測(cè)指標(biāo)及測(cè)定方法 ............. 24
第 3 章  結(jié)果與分析 ........................... 30 
3.1Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠生長(zhǎng)的影響 ........... 30
3.2 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒肝臟損傷的影響 ............. 33
3.3 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠腎臟的保護(hù)作用 .... 42
第 4 章  討論與結(jié)論 ................ 52 
4.1 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠生長(zhǎng)的影響 .. 52 
4.2 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠肝臟損傷的保護(hù)及機(jī)制..... 53
4.3 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠腎臟損傷的保護(hù)及機(jī)制 ....... 56 
4.4 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠睪丸損傷的保護(hù)及機(jī)制 .............. 57 
4.5  結(jié)論 ............... 59

第 3 章 結(jié)果與分析 

3.1Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠生長(zhǎng)的影響

由表 3.1 所示：初始體重，所有大鼠無(wú)顯著差異 P>0.05。連續(xù)處理 5 天，各處理中組大鼠體重均呈現(xiàn)不同程度的降低。其中，鎘處理組大鼠較對(duì)照組極顯著降低 P<0.01，低劑量保護(hù)組大鼠較鎘處理組顯著降低 P<0.05，高劑量保護(hù)組大鼠體重較鎘處理組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異但較正常組極顯著降低 P<0.01。鉛處理保護(hù)組體重較鉛處理組體重呈上升趨勢(shì)，體現(xiàn)部分劑量效應(yīng)關(guān)系。體重從側(cè)面反映機(jī)體損傷情況，高級(jí)劑量保護(hù)組大鼠體重變化均顯示很好的劑量效應(yīng)關(guān)系，變現(xiàn)為劑量升高，體重增重明顯。

3.2 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒肝臟損傷的影響

由圖 3.3：正常對(duì)照組，顯微鏡下肝細(xì)胞排列有序，肝細(xì)胞無(wú)腫脹、無(wú)脂肪樣變性。鎘、鉛單獨(dú)處理組大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)異常，部分肝細(xì)胞腫脹，并可見(jiàn)顯著的大面積脂肪壞死，細(xì)胞內(nèi)存在大量脂滴，胞漿疏松，膨脹變性，出現(xiàn)核固縮，局部出現(xiàn)片狀壞死灶；細(xì)胞質(zhì)解離，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。大鼠在肝臟組織中還有大量紅細(xì)胞浸潤(rùn)。分散的肝細(xì)胞呈團(tuán)狀聚集，肝細(xì)胞輪廓不清晰，甚至有的肝臟細(xì)胞輪廓消失，肝細(xì)胞局灶性壞死，細(xì)胞核也部分溶解消失，細(xì)胞核間有異物夾雜和細(xì)胞碎片。低劑量保護(hù)組細(xì)胞仍可見(jiàn)部分空泡化壞死，其程度和范圍均較污染物處理組有所緩解。肝細(xì)胞仍清晰可見(jiàn)少量小脂滴出現(xiàn)，未出現(xiàn)大面積氣球樣變。

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第 4 章  討論與結(jié)論 

4.1 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠生長(zhǎng)的影響

整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)照組食欲、飲水正常，生長(zhǎng)迅速，體重上升明顯。鉛、鎘處理各組大鼠被毛失去光澤、暗黃，目光呆滯、嗜睡，體重變化未顯現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。鎘處理組大鼠終末體重較正常對(duì)照組下降，低劑量保護(hù)組輕微下降，高劑量保護(hù)組體重較鎘處理呈上升趨勢(shì)。鉛處理及其保護(hù)組大鼠體重并未顯現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變化，鉛處理組肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、睪丸指數(shù)均隨 cy-3-glu 劑量增加顯示上升趨勢(shì)。胸腺、脾臟、胰臟指數(shù)隨 cy-3-glu 劑量增加并未體現(xiàn)很好的量效關(guān)系，低劑量保護(hù)組各臟器系數(shù)不同程度的上升，高劑量保護(hù)組指數(shù)呈下降趨勢(shì)。

4.2 Cy-3-glu 對(duì) Cd、Pb 染毒大鼠肝臟損傷的保護(hù)及機(jī)制

鎘、鉛脅迫及 cy-3-glu 保護(hù)各組 ROS、MDA 測(cè)定結(jié)果顯示，各組 ROS、MDA含量均不同程度上升，表明鎘、鉛兩種污染物可能通過(guò)氧化應(yīng)激通路影響細(xì)胞、臟器代謝從而造成機(jī)體損傷。鎘脅迫及高、低保護(hù)組大鼠肝臟的 ROS 測(cè)定結(jié)果顯示鎘處理組較正常對(duì)照組肝臟 ROS 升高（較正常對(duì)照組升高 0.67 倍），cy-3-glu保護(hù)組 ROS 均表現(xiàn)不同程度的降低。這與 MDA 測(cè)定結(jié)果鎘脅迫高、低 cy-3-glu保護(hù)組 MDA 含量隨著保護(hù)劑量的增加，MDA 含量下降是一致。鎘脅迫高劑量保護(hù)組顯示 MDA 含量基本恢復(fù)到正常水平（較對(duì)照組高 0.31 倍）。鉛處理及低劑量保護(hù)組、高劑量保護(hù)組 ROS 變化不顯著但 MDA 含量隨 cy-3-glu 劑量升高呈明顯下降趨勢(shì)（P<0.05）。推測(cè)鎘、鉛進(jìn)入肝臟，導(dǎo)致肝臟代謝紊亂而生成過(guò)多的自由基，脂質(zhì)過(guò)氧化程度增加，表現(xiàn)為鎘、鉛處理均使肝臟 ROS、MDA 較對(duì)照組升高。Cy-3-glu 報(bào)道具有較強(qiáng)的清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明保護(hù)組均使 ROS、MDA 呈下降趨勢(shì)，其中鉛處理組 MDA 含量顯著下降P<0.05。其清除過(guò)程涉及眾多細(xì)胞反應(yīng)，其抗氧化機(jī)制仍需要進(jìn)一步氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)酶的測(cè)定結(jié)果。

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參考文獻(xiàn)（略）

本文編號(hào)：100720