發(fā)布時間：2024-07-01 21:54

　　目的為實現(xiàn)食品中17β-雌二醇(E2)污染物的超靈敏檢測,本研究將適配體、分子信標(biāo)和滾環(huán)擴增(RCA)技術(shù)相結(jié)合,用于E2的熒光檢測。方法 E2能解旋由適配體和cDNA雜交生成的復(fù)合DNA,使cDNA游離并與環(huán)DNA特異性結(jié)合,在Phi29酶的作用下生成長單鏈DNA。長單鏈DNA與分子信標(biāo)雜交后,解旋分子信標(biāo)的發(fā)夾結(jié)構(gòu),使FAM熒光基團(tuán)的熒光恢復(fù),從而實現(xiàn)E2的超靈敏檢測。結(jié)果經(jīng)過條件優(yōu)化,在0.001ng/mL-10ng/mL的濃度范圍內(nèi)E2濃度與熒光強度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系:y=594.17LgC+3868.87(R²=0.9758),檢出限為0.19 pg/mL。在牛奶和自來水中,加標(biāo)回收率分別為81.33%-117.42%和89.25%-107.04%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差是2.02%-3.13%和1.09%-2.45%。結(jié)論在本研究中,我們基于適配體技術(shù)和等溫擴增技術(shù)提出了一種E2的超靈敏熒光檢測方法。該方法靈敏度高、特異性強、操作簡單、實驗儀器要求低。該策略為E2的檢測提供了一種新的方法,也為其他污染物的檢測提供了新的思路。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 儀器和試劑
    1.2 環(huán)DNA的制備
    1.3 E2和cDNA競爭結(jié)合適配體
    1.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗
    1.5 RCA產(chǎn)物解旋分子信標(biāo)頸環(huán)結(jié)構(gòu)
    1.6 E2檢測方法
    1.7 實際樣品中E2的檢測
2 結(jié)果和討論
    2.1 合成環(huán)DNA
    2.2 E2和cDNA競爭結(jié)合適配體驗證
    2.3 RCA產(chǎn)物和分子信標(biāo)結(jié)合效果
    2.4 實驗條件優(yōu)化
    2.5 熒光檢測
    2.6 特異性實驗
    2.7 加標(biāo)回收實驗和方法學(xué)比較
3 結(jié)論



本文編號：3999239