背景和目的:骨質(zhì)疏松癥是代謝性骨病變,主要特征是骨組織量減少及骨微結(jié)構(gòu)退化,骨質(zhì)疏松可增加骨脆性和骨折。然而,骨質(zhì)疏松癥的分子機制仍不明確。糖皮質(zhì)激素直接作用于成骨細(xì)胞,導(dǎo)致成骨細(xì)胞產(chǎn)生量減少,并引起成骨細(xì)胞凋亡。長鏈非編碼RNA(LncRNA)已成為控制基因表達(dá)和影響多種生物過程的重要表觀遺傳調(diào)節(jié)因子。越來越多的證據(jù)表明LncRNA參與骨重塑,與骨質(zhì)疏松的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。人成骨細(xì)胞中,地塞米松(Dex)處理導(dǎo)致顯著的細(xì)胞毒性。LncRNA EPIC1(Lnc-EPIC1)是與Myc直接作用的LncRNA。本論文主要檢測了 Lnc-EPIC1對Dex誘導(dǎo)的人成骨細(xì)胞損傷的潛在影響及機制研究。研究方法和內(nèi)容:在OB-6人成骨細(xì)胞株和原代人成骨細(xì)胞中,通過慢病毒包裹Lnc-EPIC1 載體(“LV-EPIC1”)過表達(dá) Lnc-EPIC1;并通過 siRNA 手段沉默 Lnc-EPIC1的表達(dá)。上述細(xì)胞用Dex處理后,用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測Lnc-EPIC1的表達(dá);通過MTT(3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物)法、乳酸脫氫酶(LDH)法...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?ＯＢ－６成骨細(xì)胞中地塞米松處理增加ＬｎｃＲＮＡ?ＥＰＩＣ１的表達(dá)??用慢病毒包裹的?Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ?表達(dá)載體（ｐＬｅｎｔｉ６－ｐｕｒｏ－ＧＦＰ－Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ，??

ＬｎｃＲＮＡ?ＥＰＩＣ１保護成骨細(xì)胞免受地塞米松損傷?第一部分??本課題中，我們首先檢測了地塞米松（Ｄｅｘ）對Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ表達(dá)的潛在影響。在??ＯＢ－６［１９，２８－３０］人成骨細(xì)胞株中，Ｄｅｘ處理（ｌｆｉＭ，?２４小時）后，Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ表達(dá)增??加超過一倍（圖１）。....

圖２．?ＬｎｃＲＮＡ?ＥＰＩＣｌ過表達(dá)顯著抑制地塞米松誘導(dǎo)的ＯＢ－６成骨細(xì)胞死亡??用慢病毒包裹的?Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ?表達(dá)載體（ｐＬｅｎｔｉ６－ｐｕｒｏ－ＧＦＰ－Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ，??

第一部分?ＬｎｃＲＮＡＥＰＩＣｌ保護成骨細(xì)胞免受地塞米松損傷??胞存活率（ＭＴＴＯＤ，圖２Ａ）顯著下降，而細(xì)胞死亡（ＬＤＨ釋放，圖２Ｂ）顯著增加；??而兩株ＬＶ－ＥＰＩＣ１過表達(dá)的０Ｂ－６成骨細(xì)胞中（見圖１），Ｄｅｘ?（ｌ｜ｉＭ，２４小時）誘導(dǎo)??的存活率下降（圖２Ａ）和死亡（圖....

圖３．?ＯＢ－６成骨細(xì)胞屮，ＬｎｃＲＮＡ?ＥＰＩＣ１過及達(dá)Ｖ著抑制地寒米松誘導(dǎo)的??Ｃａｓｐａｓｅ－３??

ＬｎｃＲＮＡ?ＥＰＩＣ１保護成骨細(xì)胞免受地塞米松損傷?第一部分??ＬＶ－ＥＰＩＣ１對０Ｂ－６細(xì)胞Ｃａｓｐａｓｅ－３的活化無顯著作用（圖３Ａ和Ｂ）。因此，０Ｂ－６成??骨細(xì)胞中，ＬｎｃＲＮＡＥＰＩＣｌ過表達(dá)顯著抑制Ｄｅｘ誘導(dǎo)的Ｃａｓｐａｓｅ－３活化。??Ａ．?Ｂ．??ＯＢ－６?ｃｅ....

圖４．?ＯＢ－６成骨細(xì)胞中，ＬｎｃＲＮＡＥＰＩＣ１過表達(dá)顯著抑制地塞米松誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡－１??用慢病毒包裹的Ｌｎｃ－ＥＰＩＣｌ表達(dá)載體（ｐＬｅｎｔｉ６－ｐｕｒｏ－ＧＦＰ－Ｌｎｃ－ＥＰ丨Ｃ１，??

受地塞米松損傷??Ａ．?ＯＢ－６?ｃｅｌｌｓ?Ｂ．?ＯＢ－６?ｃｅｌｌｓ?＃??Ｑ?１?２］ｃｉＶｅｃｔｏｒ?—－—?°＇５］ａ?Ｖｅｃｔｏｒ?ｆ?＾??〇?Ｓ?圈?ｌｖ－ｅＰＩＣ１（Ｌ１）?１??＜?ＢＬＶ－ｈＨＩＵＴ?（Ｌ２）?＾?Ｏ?Ｑ４?ｂＬＶ－ＥＰＩＣＩ?（Ｌ２）??§....

本文編號：4018284