乙型腦炎病毒NS1'蛋白抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子機制研究
發(fā)布時間：2024-05-16 20:50
乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一種經(jīng)蚊蟲傳播的人畜共患傳染病病原。該病毒最早于1871年在日本被發(fā)現(xiàn),對多種動物易感,其中人、馬感染后出現(xiàn)明顯的腦炎癥狀,豬感染后出現(xiàn)懷孕母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎,公豬睪丸炎,對養(yǎng)豬業(yè)造成重大危害。JEV靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS),導致致死性腦炎。近年研究表明,JEV在復制過程中,由于核糖體移碼產(chǎn)生的JEV非結構蛋白NS1’能夠明顯增加病毒的神經(jīng)侵襲力,并在JEV通過血腦屏障(BBB)中發(fā)揮重要作用,但其機制仍待闡明。作為宿主抗病毒感染的早期防御機制,Ⅰ型干擾素信號通路在宿主抗病毒免疫過程中發(fā)揮著重要作用。JEV感染宿主后,通過抑制宿主干擾素的產(chǎn)生及下游的信號轉導,可以使其在外周血中達到較高的病毒滴度,利于病毒入侵CNS。因此,研究JEV NS1’蛋白與宿主Ⅰ型干擾素之間的關系,對揭示該病毒的神經(jīng)侵襲力與致病機理具有重要科學意義�；诖�,本論文旨在以JEV NS1’蛋白為研究對象,探索NS1’蛋白抑制宿主干擾素信號對病毒復制與入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響,具體研究內容與結果如下:1.JEV NS1,缺失導致...
【文章頁數(shù)】：109 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbrevation)
第1章 文獻綜述
1.1 乙型腦炎
1.1.1 乙型腦炎的流行特征與危害
1.1.2 乙型腦炎的臨床癥狀與病理變化
1.1.3 乙型腦炎的防治
1.2 乙型腦炎病毒
1.2.1 乙型腦炎病毒編碼蛋白質及功能
1.2.2 NS1及NS1'蛋白質
1.2.2.1 NS1蛋白簡介
1.2.2.2 NS1'蛋白簡介
1.3 核糖體移碼
1.3.1 核糖體移碼的簡介
1.3.2 -1核糖體移碼的發(fā)生機制及功能
1.3.2.1 -1核糖體移碼的發(fā)生機制
1.3.2.2 -1核糖體移碼的生物學功能
1.3.3 針對核糖體移碼的抗病毒治療
1.4 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干擾素應答機制
1.4.1 干擾素簡介
1.4.1.1 Ⅰ型干擾素信號通路
1.4.1.2 干擾素誘導的效應因子
1.4.2 病毒蛋白抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
1.4.3 病毒蛋白阻斷Ⅰ型干擾素介導的信號轉導
1.4.4 黃病毒逃避Ⅰ型干擾素機制的研究進展
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
3.1 實驗材料
3.1.1 毒株、細胞、菌株與實驗動物
3.1.2 載體與質粒
3.1.3 主要藥品及試劑
3.1.4 主要培養(yǎng)基及其配方
3.1.5 主要緩沖液及其配方
3.2 實驗方法
3.2.1 質粒的構建
3.2.2 細胞培養(yǎng)與處理
3.2.2.1 細胞培養(yǎng)
3.2.2.2 質粒轉染(脂質體介導轉染法)
3.2.2.3 細胞感染JEV
3.2.2.4 Western blot
3.2.2.5 間接免疫熒光(IFA)
3.2.2.6 細胞總RNA的提取
3.2.2.7 mRNA水平的檢測
3.2.2.8 基因表達數(shù)據(jù)分析
3.2.2.9 雙熒光素酶報告實驗
3.2.2.10 病毒滴度測定
3.2.3 動物實驗分組與收樣
3.2.3.1 Balb/c小鼠腦內攻毒實驗
3.2.3.2 小鼠腹腔攻毒實驗
3.2.3.3 小鼠腦組織與血液樣品處理
3.2.4 統(tǒng)計學分析
第4章 結果與分析
4.1 NS1'缺失導致JEV神經(jīng)侵襲力減弱
4.1.1 成功構建NS1'缺失型病毒
4.1.2 NS1'缺失不影響JEV神經(jīng)毒力
4.1.3 NS1'缺失導致JEV神經(jīng)侵襲力減弱
4.1.4 NS1'蛋白可以增加rG66A毒株的致病力
4.1.5 NS1'缺失并不影響JEV在Ⅰ型干擾素受體缺失小鼠上的神經(jīng)侵襲力
4.2 NS1'蛋白抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.2.1 NS1'蛋白缺失上調JEV誘導Ⅰ型干擾素及下游ISGs分子
4.2.2 分泌型NS1'不影響Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.2.3 細胞內過表達NS1'蛋白能夠抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.3 NS1'蛋白靶向MAVS抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.3.1 NS1'蛋白抑制IFN-β啟動子活性
4.3.2 NS1'蛋白通過靶向MAVS抑制IFN-β啟動子活性
4.3.3 NS1'蛋白通過調控miR22來抑制MAVS mRNA的表達
第5章 討論
5.1 -1PRF在JEV復制與免疫逃逸中的作用
5.2 sNS1'蛋白在JEV復制或傳播中的作用
5.3 NS1'蛋白抑制宿主Ⅰ型干擾素信號通路的機制
結論
參考文獻
附錄
個人簡歷
致謝
本文編號：3974891
【文章頁數(shù)】：109 頁
【學位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbrevation)
第1章 文獻綜述
1.1 乙型腦炎
1.1.1 乙型腦炎的流行特征與危害
1.1.2 乙型腦炎的臨床癥狀與病理變化
1.1.3 乙型腦炎的防治
1.2 乙型腦炎病毒
1.2.1 乙型腦炎病毒編碼蛋白質及功能
1.2.2 NS1及NS1'蛋白質
1.2.2.1 NS1蛋白簡介
1.2.2.2 NS1'蛋白簡介
1.3 核糖體移碼
1.3.1 核糖體移碼的簡介
1.3.2 -1核糖體移碼的發(fā)生機制及功能
1.3.2.1 -1核糖體移碼的發(fā)生機制
1.3.2.2 -1核糖體移碼的生物學功能
1.3.3 針對核糖體移碼的抗病毒治療
1.4 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干擾素應答機制
1.4.1 干擾素簡介
1.4.1.1 Ⅰ型干擾素信號通路
1.4.1.2 干擾素誘導的效應因子
1.4.2 病毒蛋白抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
1.4.3 病毒蛋白阻斷Ⅰ型干擾素介導的信號轉導
1.4.4 黃病毒逃避Ⅰ型干擾素機制的研究進展
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
3.1 實驗材料
3.1.1 毒株、細胞、菌株與實驗動物
3.1.2 載體與質粒
3.1.3 主要藥品及試劑
3.1.4 主要培養(yǎng)基及其配方
3.1.5 主要緩沖液及其配方
3.2 實驗方法
3.2.1 質粒的構建
3.2.2 細胞培養(yǎng)與處理
3.2.2.1 細胞培養(yǎng)
3.2.2.2 質粒轉染(脂質體介導轉染法)
3.2.2.3 細胞感染JEV
3.2.2.4 Western blot
3.2.2.5 間接免疫熒光(IFA)
3.2.2.6 細胞總RNA的提取
3.2.2.7 mRNA水平的檢測
3.2.2.8 基因表達數(shù)據(jù)分析
3.2.2.9 雙熒光素酶報告實驗
3.2.2.10 病毒滴度測定
3.2.3 動物實驗分組與收樣
3.2.3.1 Balb/c小鼠腦內攻毒實驗
3.2.3.2 小鼠腹腔攻毒實驗
3.2.3.3 小鼠腦組織與血液樣品處理
3.2.4 統(tǒng)計學分析
第4章 結果與分析
4.1 NS1'缺失導致JEV神經(jīng)侵襲力減弱
4.1.1 成功構建NS1'缺失型病毒
4.1.2 NS1'缺失不影響JEV神經(jīng)毒力
4.1.3 NS1'缺失導致JEV神經(jīng)侵襲力減弱
4.1.4 NS1'蛋白可以增加rG66A毒株的致病力
4.1.5 NS1'缺失并不影響JEV在Ⅰ型干擾素受體缺失小鼠上的神經(jīng)侵襲力
4.2 NS1'蛋白抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.2.1 NS1'蛋白缺失上調JEV誘導Ⅰ型干擾素及下游ISGs分子
4.2.2 分泌型NS1'不影響Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.2.3 細胞內過表達NS1'蛋白能夠抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.3 NS1'蛋白靶向MAVS抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
4.3.1 NS1'蛋白抑制IFN-β啟動子活性
4.3.2 NS1'蛋白通過靶向MAVS抑制IFN-β啟動子活性
4.3.3 NS1'蛋白通過調控miR22來抑制MAVS mRNA的表達
第5章 討論
5.1 -1PRF在JEV復制與免疫逃逸中的作用
5.2 sNS1'蛋白在JEV復制或傳播中的作用
5.3 NS1'蛋白抑制宿主Ⅰ型干擾素信號通路的機制
結論
參考文獻
附錄
個人簡歷
致謝
本文編號：3974891
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