巴馬小香豬與環(huán)江小香豬是分別原產(chǎn)于廣西巴馬瑤族自治縣和環(huán)江毛南族自治縣的地方小型豬品種,具有很高的農(nóng)業(yè)開發(fā)和的生物醫(yī)學(xué)研究利用價(jià)值。本研究將就體細(xì)胞克隆(Somatic Cell Cloning)及其介導(dǎo)的基因修飾(Genetic Modification)在巴馬小香豬和環(huán)江小香豬的應(yīng)用展開研究,以期為廣西地方特色小型豬的種質(zhì)資源保存、良種快繁、遺傳選育以及培育具有農(nóng)業(yè)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)際用途的體細(xì)胞克隆和基因修飾廣西地方特色小型豬奠定基礎(chǔ)。本研究主要開展的工作和結(jié)果簡述如下:(1)體細(xì)胞克隆巴馬小香豬的生產(chǎn)和轉(zhuǎn)基因克隆胚胎的制備本章旨在建立巴馬小香豬體細(xì)胞克隆和轉(zhuǎn)基因克隆胚胎制備的技術(shù)體系。首先制備新生雄性巴馬小香豬腎臟成纖維細(xì)胞,驗(yàn)證其不僅具有優(yōu)異的細(xì)胞增殖活性,還能支持克隆胚胎完全的體外和體內(nèi)發(fā)育潛能,并最終獲得0.66%(11/1658)的體細(xì)胞克隆豬生產(chǎn)效率,表明新生豬腎臟成纖維細(xì)胞是一種適于生產(chǎn)體細(xì)胞克隆巴馬小香豬的細(xì)胞資源。然后利用Xfect轉(zhuǎn)染試劑和紅色熒光蛋白DsRed轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒來檢驗(yàn)新生巴馬小香豬腎臟成纖維細(xì)胞是否適于基因修飾操作。結(jié)果表明在經(jīng)優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件(DNA劑量與...

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【學(xué)位級別】：博士

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圖１．１巴馬小香豬（Ａ）與環(huán)江小香豬（Ｂ）??

香豬、貴州白香豬、久仰香豬和巴馬香豬等７種，其中巴馬香豬和環(huán)江香豬是原產(chǎn)于廣??西壯族自治區(qū)境內(nèi)的小型豬品種。??巴馬香豬，也稱巴馬小香豬（圖１．１Ａ），原產(chǎn)于廣西巴馬瑤族自治縣，膚色特征為“兩??頭烏”（即頭部和臀部的皮膚和被毛為黑色，其它身體部位為白色）。巴馬小香豬皮薄肉??....

圖１．２轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆豬生產(chǎn)流程??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ?ｆｏｒ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ－ｃｌｏｎｅｄ?ｐｉｇｓ??１．４核移植技術(shù)在豬基因修飾中的應(yīng)用??

也被稱為“體細(xì)胞克隆”（Ｓｏｍａｔｉｃ?Ｃｅｌｌ?Ｃｌｏｎｉｎｇ）。??核移植法介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)就是先對核移植供體細(xì)胞進(jìn)行基因修飾，然后在經(jīng)??ＳＣＮＴ制備出轉(zhuǎn)基因克隆后代。如圖１．２所示，利用ＳＣＮＴ構(gòu)建轉(zhuǎn)基因豬的主要程序可??分為：（１）基因修飾供體細(xì)胞的制備；（２）卵母細(xì)胞....

圖２．１體細(xì)胞核移植操作程序圖解??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｐｒｏｃｅｄｕｒａｌ?ｄｉａｇｒａｍｓ?ｏｆ?ｓｏｍａｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｔｒａｎｓｆｅｒ?（ＳＣＮＴ）??

ｒｐｍ離心５?ｍｉｎ，用核移植操作液（洗卵液＋１０％ＦＢＳ）重懸備用。在６０?ｍｍ細(xì)胞培養(yǎng)皿上制??作操作液滴并用礦物油覆蓋，向操作液滴中移入挑選好的ＭＩＩ期卵母細(xì)胞和供體細(xì)胞懸??液，然后在顯微操作儀上進(jìn)行ＳＣＮＴ操作。如圖２．１所示，ＳＣＮＴ操作程序簡述如下：??ｓｓｓｓｇｓ....

圖２．２豬胚胎移植操作圖示??

ｒｐｍ離心５?ｍｉｎ，用核移植操作液（洗卵液＋１０％ＦＢＳ）重懸備用。在６０?ｍｍ細(xì)胞培養(yǎng)皿上制??作操作液滴并用礦物油覆蓋，向操作液滴中移入挑選好的ＭＩＩ期卵母細(xì)胞和供體細(xì)胞懸??液，然后在顯微操作儀上進(jìn)行ＳＣＮＴ操作。如圖２．１所示，ＳＣＮＴ操作程序簡述如下：??ｓｓｓｓｇｓ....

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