干擾素(Interferon,IFN)是機體抗病毒感染的第一道免疫屏障,應(yīng)用領(lǐng)域已逐步發(fā)展到抗病毒、抗腫瘤等方面。犬干擾素α(Canine Interferon alpha,CaIFNα)是犬類動物在受到外界特定刺激后,免疫細胞分泌的細胞因子之一,具有廣譜抗病毒、加強免疫應(yīng)答反應(yīng)、弱抗原性等一系列特點。CaIFNα的抗病毒作用主要與干擾素刺激基因產(chǎn)物(Interferon Stimuluated Genes,ISGs)有關(guān),ISGs通過抑制病毒核酸的轉(zhuǎn)錄翻譯及蛋白合成從而發(fā)揮抗病毒作用。但是由于CaIFNα半衰期短等原因限制了 CaIFNα在臨床中的應(yīng)用。蓖麻毒素(Ricin toxin,RT)為一種高毒性的植物蛋白,主要存在于蓖麻籽中,由A鏈和B鏈組成,兩條鏈通過二硫鍵連接,其中RTA是毒性鏈,RTB是運載體,具有凝集素作用,與哺乳細胞膜表面甘露糖受體結(jié)合,運輸RTA亞基進入細胞內(nèi)部發(fā)揮毒性。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)重組RTB可作為免疫增強劑,增強機體細胞免疫應(yīng)答及體液免疫應(yīng)答。并且可巨噬細胞增加JAK1、TYK2、STAT1等細胞因子磷酸化水平。本研究采用基因重組表達技術(shù),將CaIFNα...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．４重組質(zhì)粒ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ限制性內(nèi)切酶酶切鑒定??

軍事科學院博士學位論文??１．３．１．２重組ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ克隆質(zhì)粒鑒定??ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ?＾的基因重疊ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)膠回收后與ｐＭＤ１８Ｔ載體進行連接，??轉(zhuǎn)化后的ＴｏｐｌＯ大腸桿菌感受態(tài)細胞進行藍白斑篩選并擴大培養(yǎng)，對提取的質(zhì)粒??進行ＰＣＲ和Ｍ／ｅ?Ｉ....

圖１．３重組質(zhì)粒ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ的ＰＣＲ鑒定結(jié)果??

軍事科學院博士學位論文??１．３．１．２重組ｐＭＤ１８Ｔ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ克隆質(zhì)粒鑒定??ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ?＾的基因重疊ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)膠回收后與ｐＭＤ１８Ｔ載體進行連接，??轉(zhuǎn)化后的ＴｏｐｌＯ大腸桿菌感受態(tài)細胞進行藍白斑篩選并擴大培養(yǎng)，對提取的質(zhì)粒??進行ＰＣＲ和Ｍ／ｅ?Ｉ....

圖１．５?ｐＥＴ２８ａ－ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ重組表達質(zhì)粒限制性內(nèi)切酶酶切鑒定??

，將所獲得的ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ目的片段連接至大腸桿菌??表達載體ｐＥＴ２８ａ中，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至ＴｏｐｌＯ感受態(tài)細胞，經(jīng)Ｋａｎ＋抗性擴大培養(yǎng)??并提取重組表達質(zhì)粒。重組表達質(zhì)粒進行限制性內(nèi)切酶酶切鑒定鑒定。酶切產(chǎn)物??經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳分析，與預(yù)期結(jié)果相符。限制性內(nèi)切酶酶切鑒定....

圖１．６?ＣａＩＦＮａ／ＲＴＢ核酸序列示意圖??

?軍事科學院博士孛、位論文???Ｇｅｎｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ??Ｆｅａｔｕｒｅ?Ｋｅｙ?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?Ｇｒａｐｈｉｃａｌ?Ｖｉｅｗ?Ｌｅｎｇｔｈ??Ｇｅｎｅ?Ｉ?１－４３５?Ｃａｎｉｎｅ?Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ?ａ?４３５??Ｇｅｎｅ?ＩＩ?４３６－５....

本文編號：3968054