本文關(guān)鍵詞：賈第蟲病毒microRNA克隆及功能研究

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【摘要】：賈第蟲是一個(gè)原始的真核生物,同時(shí)也是一個(gè)重要的人獸共患病病原,具有重要的進(jìn)化生物學(xué)研究價(jià)值,賈第蟲作為模式生物仍然有很多問題需要解決。賈第蟲病毒是由一個(gè)線形的末端開放的7.0 Kb ds RNA和100 KDa的衣殼蛋白組成。microRNA是由內(nèi)含子或編碼基因間隔區(qū)的RNA基因編碼的,長度大小為18-24個(gè)堿基的小分子RNA,能通過與靶m RNA特異性的堿基配對引起靶m RNA的降解或抑制其翻譯,從而對基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控。但對于賈第蟲病毒是否存在microRNA尚不清楚。本研究通過Solexa高通量測序及生物信息學(xué)分析結(jié)合VMIR軟件預(yù)測,初步確定5條賈第蟲病毒候選非編碼小RNA,利用RT-PCR、Northern雜交、Dicer酶切割、熒光定量PCR等方法驗(yàn)證賈第蟲病毒一條小RNA為賈第蟲病毒的microRNA,命名為GLV microRNA1,其大小為22nt,尤為重要的是其位于pol蛋白編碼區(qū),這也是目前所發(fā)現(xiàn)的第一條原蟲病毒的microRNA。熒光原位雜交試驗(yàn)顯示賈第蟲病毒GLV microRNA1確實(shí)存在,且定位在細(xì)胞質(zhì)中,符合經(jīng)典的microRNA定位。賈第蟲病毒microRNA功能研究通過knock-down GLV MicroRNA1,熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)抑制GLV microRNA1后,賈第蟲病毒拷貝數(shù)增長30%左右,表明GLV microRNA1能有效控制賈第蟲病毒的拷貝數(shù)。流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡也顯示,轉(zhuǎn)染GLV microRNA1組賈第蟲滋養(yǎng)體的數(shù)量及亮度均明顯下降,而轉(zhuǎn)染反義GLV microRNA1組賈第蟲滋養(yǎng)體的數(shù)量及亮度均明顯上升。但GLV microRNA1對賈第蟲形態(tài)和生長曲線等尚未發(fā)現(xiàn)有明顯的影響。雙熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)測定表明GLV microRNA1的靶標(biāo)gag-pol的3'UTR發(fā)揮重要作用,同時(shí)其作用方式為切割靶序列。GLV microRNA1是目前發(fā)現(xiàn)的第一條位于基因的編碼區(qū)域的microRNA。該發(fā)現(xiàn)可能進(jìn)一步拓寬了人們對非編碼RNA的生成方式認(rèn)知,即m RNA可能需要在編碼小RNA和翻譯蛋白質(zhì)之間有一個(gè)平衡,這種平衡可能是基因表達(dá)調(diào)控的一種新方式。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.7

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1 田明;費(fèi)菁;胡曉湘;李寧;劉娣;孟慶勇;;microRNA-1,-133,-206在鼠肌肉中的表達(dá)譜[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年08期

2 王春梅;李慶章;;microRNA在小鼠乳腺不同發(fā)育時(shí)期差異表達(dá)譜及作用(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2007年11期

3 蔡斌;李成慧;彭日荷;熊愛生;高峰;姚泉洪;章鎮(zhèn);;葡萄microRNA的計(jì)算識別[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2008年S2期

4 鄒文輝;;新奇的調(diào)控分子——microRNA[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年34期

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7 穆松;鐘金城;陳智華;徐利娟;;�；蚪Mper-microRNA SNP多態(tài)性[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2011年10期

8 李構(gòu);張辰宇;;血清microRNA在癌癥診斷中的進(jìn)展[J];東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年06期

9 李瑩;鞠輝明;白立景;李奎;敖紅;;豬microRNA-378-1過表達(dá)載體構(gòu)建及細(xì)胞水平驗(yàn)證[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2012年08期

10 焦晶凱;莫蓓紅;高紅艷;;microRNA功能研究新進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年02期

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1 荊清;袁文俊;秦永文;;microRNA的基因調(diào)控新功能[A];中國生理學(xué)會第五屆全國心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2005年

2 靳新;駱志剛;王金華;管乃洋;;microRNA靶標(biāo)研究進(jìn)展[A];中國遺傳學(xué)會功能基因組學(xué)研討會論文集[C];2006年

3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2008年

4 朱丹霞;徐衛(wèi);繆扣榮;方成;朱華淵;董華潔;王冬梅;范磊;喬純;李建勇;;慢性淋巴細(xì)胞白血病microRNA異常表達(dá)研究[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

6 金希;厲有名;;單純性脂變與非酒精性脂肪性肝炎間差異microRNA表達(dá)譜研究[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

7 賈新正;盧肖男;聶慶華;張細(xì)權(quán);;雞部分microRNA的同源預(yù)測與克隆驗(yàn)證[A];中國動物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國動物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2009年

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9 徐小濤;陸曉;孫婧;束永前;;肺癌側(cè)群細(xì)胞microRNA表達(dá)譜檢測及初步分析[A];2010’全國腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

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2 記者 陳青;2厘米以下肝癌檢出率88%[N];文匯報(bào);2011年

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6 張麗;microRNA通過調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)參與血管性認(rèn)知障礙發(fā)生發(fā)展[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

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8 方硯田;結(jié)腸癌干細(xì)胞分選、差異microRNA表達(dá)譜檢測以及miR-449b-CCND1、E2F3通路在結(jié)腸癌干細(xì)胞自我更新的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

9 辛成齊;椰棗microRNA鑒定及其在果實(shí)發(fā)育過程中的表達(dá)譜研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

10 李棟;先天性心臟病血漿microRNA表達(dá)譜及與GATA4靶序列單核苷酸多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究[D];山東大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高智紅;應(yīng)用多樣性增量方法識別人類基因組microRNA前體序列[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2010年

2 王娜娜;microRNA進(jìn)化關(guān)系及編碼特性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2007年

3 王玫;小麥microRNA的鑒定與分析[D];南昌大學(xué);2007年

4 秦保東;原發(fā)性膽汁性肝硬化microRNA表達(dá)譜的檢測及其功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 徐嬌陽;循環(huán)microRNA用于低氧性肺動脈高壓早期診斷的實(shí)驗(yàn)研究[D];石河子大學(xué);2015年

6 余綺荷;晚期結(jié)直腸癌一線化療的臨床療效預(yù)后分析及療效相關(guān)microRNA的初步篩選[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 蔡雨函;乙型腦炎病毒的分離鑒定及其在microRNA水平上與PK-15細(xì)胞的相互作用研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 葉泥;山羊地方性鼻內(nèi)腺瘤microRNA的表達(dá)差異研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李敏;活血化痰安神方對冠心病心絞痛痰瘀互結(jié)證患者臨床及microRNA研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

10 程冉;桂枝茯苓丸加味治療子宮肌瘤的療效觀察及對血清microRNA表達(dá)譜的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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本文編號：1273299