目的:GATA4是參與心臟發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子。本課題組前期在室間隔缺損(ventricular septal defect,VSD)患者心肌組織中發(fā)現(xiàn)了一種特殊類型的GATA4突變(p.S335X),此突變可使終止密碼子提前產(chǎn)生,導(dǎo)致GATA4的C末端缺失。為進(jìn)一步了解p.S335X突變對(duì)心肌細(xì)胞的作用及其機(jī)制,我們使用體外培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞株H9C2,轉(zhuǎn)染野生型GATA4(pcDNA6-GATA4-WT,WT)及突變型GATA4p.S335X(pcDNA6-GATA4-MU,MU)載體,驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率后,考察GATA4 p.S335X對(duì)H9C2細(xì)胞凋亡的影響及經(jīng)典凋亡通路AKT/FOXO/Bcl-2的參與作用。在此基礎(chǔ)上,我們進(jìn)一步篩選了除經(jīng)典Bcl-2凋亡途徑之外,GATA4 p.S335X對(duì)其他凋亡相關(guān)的下游分子/信號(hào)通路的調(diào)控作用。方法:大鼠心肌細(xì)胞H9C2體外培養(yǎng),轉(zhuǎn)染W(wǎng)T、MU及對(duì)照(pcDNA6,EV)載體,通過收集轉(zhuǎn)染后H9C2細(xì)胞的RNA和總蛋白,分別使用Real-Time PCR和Western blot驗(yàn)證細(xì)胞中GATA4 mRNA和蛋白表達(dá),鑒定轉(zhuǎn)染成功。進(jìn)一步使...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料和方法
    一、材料與試劑
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 Western Blot
        2.2 Real-Time PCR
            2.2.1 提取RNA
            2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄
            2.2.3 Real-Time PCR
        2.3 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)
            2.3.1 細(xì)胞傳代
            2.3.2 細(xì)胞凍存
            2.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇
            2.3.4 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞
            2.3.5 TNF誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞凋亡模型
        2.4 TUNEL
        2.5 PCR Array
            2.5.1 RNA提取
            2.5.2 逆轉(zhuǎn)錄
            2.5.3 RT2 Profile PCR Arrays
        2.6 統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果
    1 載體在H9C2細(xì)胞中表達(dá)
    2 載體初步功能測(cè)定
    3 GATA4 p.S335X對(duì)AKT/FOXO/Bcl-2通路的影響
    4 TNF誘導(dǎo)后GATA4 p.S335X對(duì)AKT/FOXO/Bcl-2通路的影響
    5 PCR Array篩選GATA4 p.S335X與野生型差異基因
討論
結(jié)論和展望
參考文獻(xiàn)
中文綜述 轉(zhuǎn)錄因子與心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章情況
致謝



本文編號(hào)：3992936