發(fā)布時(shí)間：2020-12-06 04:40

　　目的:新輔助放化療后的療效判斷對(duì)于局部晚期直腸癌的綜合治療策略非常有意義。新輔助放化療后達(dá)到臨床完全緩解（cCR）的患者可采用“觀察等待”策略,避免手術(shù)保留直腸器官。當(dāng)前挑戰(zhàn)在于如何評(píng)價(jià)cCR的時(shí)機(jī)和標(biāo)準(zhǔn),以及缺乏更精確的判斷和預(yù)測(cè)cCR的方法。目前的影像學(xué)等常規(guī)方法無(wú)法準(zhǔn)確識(shí)別cCR。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）是腫瘤生物標(biāo)志物的實(shí)時(shí)來(lái)源。CTCs的分離和分型將有助于識(shí)別cCR患者,CTCs動(dòng)態(tài)觀察可監(jiān)測(cè)直腸癌新輔助放化療治療的療效。方法:本研究采集了 2017-01至2019-11在安徽省立醫(yī)院診斷為直腸癌的48例患者外周血樣本,進(jìn)行本項(xiàng)目研究。第一次血樣采樣在患者新輔助放化療前,第二次血液采樣在手術(shù)前。所有血液樣本均在采集后4 h內(nèi)處理。為避免產(chǎn)生偏見,收集樣本,收集和/或分析數(shù)據(jù)或評(píng)估CTCs亞型的醫(yī)師和患者均不知臨床分期。本研究使用CanPatrol CTCs富集技術(shù),外周血標(biāo)本中CTCs計(jì)數(shù)>3個(gè)CTCs/7.5 ml則被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。采用磁共振進(jìn)行臨床分期和療效判斷。分析臨床病理參數(shù)與不同EMT表型的CTCs在局部晚期直腸癌患者中的臨床意義。結(jié)果:本研究納入了 48例符... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：循環(huán)腫瘤細(xì)胞形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移不意圖（Ｍａｓｓａｇｕ６，Ｊ，Ｎａｔｕｒｅ，２０１６）??ＣＴＣｓ是液體活檢重要的組成部分［２］

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???糸籲參?ｃ＿？ｒ？＾一?＿?？??？?Ｗ〇〇４?＜？？？?ＭＩＭ?Ｐ＊ｒｖ？ｃｎ？?Ｃ??—二一??：??（ｄ，??圖２：膜孔大小及過(guò)濾裝置示意圖（Ｙｏｏｎ?Ｙ，?Ｓｃｉ?Ｒ印，２０１６）??該裝置設(shè)計(jì)了包括１２個(gè)直徑為８ｐｍ圓柱形的孔，可直接過(guò)濾１０?ｍｌ?１：１０稀釋的??樣品�？梢栽诓黄茐哪[瘤細(xì)胞的情況下富集到腫瘤細(xì)胞，但其特異性低阻礙了其??實(shí)用性。與ＩＳＥＴ？相似，ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？過(guò)濾裝置使用圓形的過(guò)濾膜，具有６．５ｐｍ和??７．５?ｐｍ的濾孔，分別用于分離流動(dòng)細(xì)胞和吸附固定細(xì)胞。該設(shè)備包括三種不同的??類型：ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ１＊?ｃｅｌｌ分離固定相細(xì)胞用于細(xì)胞學(xué)研宄；ＳｃｒｅｅｎＣｅｌ廣ＣＣ和??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？ＭＢ分離流動(dòng)相細(xì)胞，用于細(xì)胞分子生物學(xué)。與ＩＳＥＴ？相比，??ＳｃｒｅｅｎＣｅｌｌ？具有可富集不固定活動(dòng)細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)。然而，由于白細(xì)胞的污染，特異??性仍有待提高。此外，ＣｅｌｌＳｉｅｖｅ？（Ｃｒｅａｔｖ?ＭｉｃｒｏＴｅｃｈ）包含１６０，０００個(gè)直徑為７?ｆｘｍ??濾孔，均勻分布在直徑９ｍｍ的過(guò)濾區(qū)域。該設(shè)計(jì)分別將液相和固相的捕獲效率??分別提高了?２５％和３５％。此外，過(guò)濾器污染從４７８４０個(gè)減少到３９２０個(gè)白細(xì)胞，??減少了十倍以上。如何進(jìn)一步優(yōu)化過(guò)濾裝置是微孔過(guò)濾分離富集ＣＴＣｓ的核心。??采用ＲＩＥ技術(shù)來(lái)刻蝕聚對(duì)二甲苯膜，可以精確控制過(guò)濾器中膜孔大小，幾何形??狀和密度�？梢栽冢欤悖恚驳木蹖�(duì)二甲苯膜上刻出ｌＯｐｎ直徑的圓形膜孔。使ＣＴＣｓ??的回收率＞９０％。然而，由于ＣＴＣｓ和白細(xì)胞之間的大小重疊，基于過(guò)濾器的分??離富集ＣＴ

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???（ａ）?７ｂ）＂＂??ＢＴＩｆｌｆ漏＝纖二纖??ｒＺｇ＾Ｂｇ??ｐｉ邊＿??，分？－〇「］?Ｍ?＊?—？…一??７－＾ｌｉｍｍ?Ｓ？：：：：Ｓ??Ｖｅｌｏｃｉｔｙ?Ｖａｌｌｅｙ?Ｍａｇｎｅｔｉｃ?Ｒａｎｋｉｎｇ??圖３：基于抗體的代表性ＣＴＣ富集技術(shù)原理ａ?：?ＣＴＣ芯片。ｂ：?３ＤＰＤＭＳ??支架芯片。Ｃ：微流體分型技術(shù)（ＰｏｕｄｉｎｅｈＭ，?ＮａｔＮａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１７）??人字形（ＨＢ）芯片的工作原理與ＣＴＣ芯片相同，只不過(guò)它是由ＰＤＭＳ制成。??ＨＢ芯片的設(shè)計(jì)旨在通過(guò)人字形增強(qiáng)ＣＴＣ捕獲效率，該人字形通過(guò)誘導(dǎo)微渦旋破??壞層流，從而增加了?ＣＴＣ與設(shè)備中功能化表面的相互作用。ＨＢ芯片在相同流速??下提高了?ＣＴＣｓ的捕獲效率。ＮａｎｏＶｅｌｃｒｏ?ＣＴＣ芯片采用納米柱涂層，可最大程??度地提高ＣＴＣｓ和抗ＥｐＣＡＭ抗體之間的接觸頻率，從而提高ＣＴＣ的捕獲率。??２．?１．３第三類：雜交分離富集技術(shù)??第一類和第二類技術(shù)都有其優(yōu)勢(shì)和局限性，因此將它們組合在同一設(shè)備中可??以減少每種技術(shù)各自面臨的弊端，并為ＣＴＣｓ富集提供更高的靈敏度和特異性??［２４］。在ＣＴＣ－ｉＣｈｉｐ分離富集系統(tǒng)中。將基于細(xì)胞大小過(guò)濾，磁珠抗體分選組合??在一個(gè)設(shè)備中［２５］。在陰性選擇模式下，將全血樣品與ＣＤ１５和ＣＤ４５免疫磁珠預(yù)??混合用以標(biāo)記白細(xì)胞。然后在預(yù)先標(biāo)記有抗ＥｐＣＡＭ偶聯(lián)的免疫磁珠進(jìn)行陽(yáng)性選??擇。在分離富集時(shí)體積較小的紅細(xì)胞和血小板在過(guò)濾階段首先被清除，而有核細(xì)??胞（白細(xì)胞和ＣＴＣｓ）則進(jìn)入下一階段。白細(xì)胞和ＣＴＣｓ通過(guò)蛇形通道時(shí)，聚焦??為單細(xì)胞排列。最后，


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