發(fā)布時(shí)間：2024-07-07 06:16

　　偏甘油酯脂肪酶是一種對(duì)酯類底物有高度選擇性的脂肪酶,能水解甘油單酯和甘油二酯底物,對(duì)甘油三酯底物無(wú)水解活力。其獨(dú)特的底物識(shí)別特性使其在油脂加工及脂質(zhì)改性領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。但目前已知的偏甘油酯脂肪酶種類甚少,對(duì)其基礎(chǔ)理論及應(yīng)用研究仍有待深入。本論文以?shī)涞厍嗝?Penicillium roqueforti)來(lái)源的偏甘油酯脂肪酶Pr Lip為研究對(duì)象,研究其異源表達(dá)及純化、酶學(xué)性質(zhì)、晶體學(xué)結(jié)構(gòu)及在高酸價(jià)油脂脫酸中的應(yīng)用,為闡明偏甘油酯脂肪酶的催化功能提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),同時(shí)為工業(yè)應(yīng)用提供科學(xué)指導(dǎo)。具體研究?jī)?nèi)容以及結(jié)果如下:(1)偏甘油酯脂肪酶Pr Lip的制備及酶學(xué)性質(zhì)研究。構(gòu)建Pr Lip畢赤酵母基因工程菌,篩選獲得高效表達(dá)目標(biāo)蛋白的陽(yáng)性克隆菌株。30℃發(fā)酵培養(yǎng)60 h后利用陰離子交換層析法純化粗酶液,獲得純度大于90%的重組Pr Lip,SDS-PAGE顯示其蛋白分子量大小為31 k Da。酶學(xué)性質(zhì)表征結(jié)果顯示:該酶的最適反應(yīng)溫度為45℃,最適反應(yīng)p H值為7.0,40℃條件下半衰期為6 h。Pr Lip在堿性環(huán)境中更穩(wěn)定,具有良好的溫度耐受性及表面活性劑耐受性。通過(guò)Pr Lip催化水解...

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號(hào)表
第一章 緒論
    1.1 偏甘油酯脂肪酶的簡(jiǎn)介
        1.1.1 偏甘油酯脂肪酶的來(lái)源
        1.1.2 偏甘油酯脂肪酶的生理功能
    1.2 偏甘油酯脂肪酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.2.1 偏甘油酯脂肪酶的結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展
        1.2.2 偏甘油酯脂肪酶的底物識(shí)別機(jī)制
    1.3 偏甘油酯脂肪酶的工業(yè)應(yīng)用
        1.3.1 偏甘油酯脂肪酶應(yīng)用概述
        1.3.2 偏甘油酯脂肪酶在高酸價(jià)米糠油脫酸中的應(yīng)用
    1.4 蛋白質(zhì)晶體學(xué)
        1.4.1 蛋白質(zhì)結(jié)晶原理
        1.4.2 蛋白質(zhì)結(jié)晶方法
        1.4.3 蛋白質(zhì)晶體衍射及數(shù)據(jù)處理
    1.5 本課題研究的意義和主要內(nèi)容
        1.5.1 本課題研究的意義
        1.5.2 本課題研究的主要內(nèi)容
        1.5.3 本課題研究的技術(shù)路線
第二章 脂肪酶PrLip的制備與酶學(xué)性質(zhì)研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 載體和表達(dá)宿主
        2.2.2 主要材料和試劑
        2.2.3 主要儀器和設(shè)備
        2.2.4 培養(yǎng)基及溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 脂肪酶PrLip的表達(dá)與純化
        2.3.2 脂肪酶PrLip水解酶活力及蛋白濃度的測(cè)定
        2.3.3 p H值對(duì)脂肪酶Pr Lip酶活力的影響
        2.3.4 溫度對(duì)脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.3.5 金屬離子、有機(jī)溶劑及表面活性劑對(duì)脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.3.6 制備PrLip凍干粉
        2.3.7 脂肪酶PrLip的底物選擇性
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 脂肪酶PrLip序列分析
        2.4.2 脂肪酶PrLip的表達(dá)與純化
        2.4.3 p H值對(duì)脂肪酶Pr Lip酶活力的影響
        2.4.4 溫度對(duì)脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.4.5 金屬離子、有機(jī)溶劑及表面活性劑對(duì)脂肪酶PrLip酶活力的影響
        2.4.6 脂肪酶PrLip的底物選擇性
        2.4.7 不同來(lái)源的偏甘油酯脂肪酶的酶學(xué)特性比較
    2.5 本章小結(jié)
第三章 脂肪酶PrLip的晶體制備及結(jié)構(gòu)解析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 緩沖液及優(yōu)化試劑的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 脂肪酶PrLip凝膠過(guò)濾色譜層析
        3.3.2 脂肪酶PrLip結(jié)晶蛋白濃度的篩選
        3.3.3 脂肪酶PrLip結(jié)晶條件的初篩和優(yōu)化
        3.3.4 脂肪酶PrLip晶體的觀察及撈取
        3.3.5 脂肪酶PrLip衍射數(shù)據(jù)的收集和處理
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 脂肪酶PrLip凝膠過(guò)濾層析純化
        3.4.2 脂肪酶PrLip結(jié)晶條件的篩選和優(yōu)化
        3.4.3 脂肪酶PrLip衍射數(shù)據(jù)處理
        3.4.4 脂肪酶PrLip的結(jié)構(gòu)分析
    3.5 本章小結(jié)
第四章 脂肪酶PrLip催化高酸價(jià)米糠油脫酸的應(yīng)用研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 流動(dòng)相及緩沖液配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 固定化載體的篩選
        4.3.2 優(yōu)化固定化的緩沖液pH值及酶載比
        4.3.3 固定化PrLip酶活力測(cè)定方法
        4.3.4 篩選固定化PrLip催化米糠油脫酸的�；�受體
        4.3.5 固定化PrLip催化高酸價(jià)米糠油脫酸的工藝優(yōu)化
        4.3.6 HPLC分析脂肪酸含量變化
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 固定化載體篩選
        4.4.2 固定化緩沖液pH值及酶載比的優(yōu)化
        4.4.3 不同�；�受體對(duì)固定化PrLip脫酸效果的影響
        4.4.4 固定化PrLip催化高酸價(jià)米糠油脫酸的工藝優(yōu)化
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、主要結(jié)論
    二、論文創(chuàng)新點(diǎn)
    三、展望與設(shè)想
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號(hào)：4003281