發(fā)布時間：2024-06-11 05:15

　　目的:煙草除用于制造卷煙外,還是心血管疾病防治藥物輔酶Q10(CoQ10)的化學合成前體物茄尼醇的最主要原料。煙葉中茄尼醇含量為0.3%-3%左右,但煙葉次生代謝物種類豐富,從中較難提取高純度的茄尼醇。毛狀根生長迅速,可以合成次生代謝物。本研究用四種發(fā)根農桿菌(Agrobacterium rhizogenes)感染煙草葉片誘導產生毛狀根,探討適合煙草毛狀根誘導的適宜菌株,以誘導子作為調控因子對煙草毛狀根的生長和茄尼醇積累進行研究,篩選對煙草毛狀根生長和茄尼醇積累誘導效果更好的誘導子。方法:本研究利用四種發(fā)根農桿菌誘導煙草無菌葉片,篩選適合煙草毛狀根誘導的菌株。在接種量和基本培養(yǎng)基兩個方面優(yōu)化培養(yǎng)條件,以獲得生長迅速、茄尼醇含量相對較高的煙草毛狀根根系,通過PCR分子檢測農桿菌基因rolB驗證是否發(fā)生農桿菌基因的轉移。在培養(yǎng)的0d,9d,18d分別添加5μM,10μM,20μM,50μM的H₂O₂和10μM,50μM,100μM,200μM的水楊酸(SA),研究煙草毛狀根茄尼醇誘導的適宜誘導子以及其添加時間和濃度對煙草毛狀根生長量茄尼醇含量的影...

【文章頁數】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 研究意義
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 茄尼醇概述
        1.2.2 毛狀根及次生代謝物
    1.3 本論文所要解決的問題
第二章 煙草毛狀根的誘導和茄尼醇含量分析
    2.1 實驗材料和儀器試劑
        2.1.1 植物材料及菌株
        2.1.2 儀器與主要試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 培養(yǎng)基配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 煙草無菌苗培養(yǎng)
        2.2.2 農桿菌的活化
        2.2.3 毛狀根的誘導與篩選
        2.2.4 毛狀根再生苗的獲得
        2.2.5 毛狀根基因組提取
        2.2.6 毛狀根的PCR檢測
        2.2.7 茄尼醇和其他主要次生代謝物含量測定
    2.3 結果分析
        2.3.1 煙草無菌苗培養(yǎng)
        2.3.2 毛狀根的誘導與篩選
第三章 煙草毛狀根培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    3.1 實驗材料和儀器試劑
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 培養(yǎng)基配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 毛狀根生長曲線測定與初始接種量的選擇
        3.2.2 毛狀根基本培養(yǎng)基篩選
    3.3 數據統(tǒng)計與分析
    3.4 結果與討論
        3.4.1 毛狀根生長曲線測定與初始接種量的選擇
        3.4.2 毛狀根基本培養(yǎng)基篩選
第四章 誘導子對煙草毛狀根中茄尼醇的誘導
    4.1 實驗材料與試劑
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 儀器與主要試劑
        4.1.3 培養(yǎng)基配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 不同誘導子處理對毛狀根生長和茄尼醇含量的影響
        4.2.2 H₂O₂處理對茄尼醇代謝途徑關鍵基因表達量的影響
    4.3 結果與分析
        4.3.1 誘導子處理對毛狀根生長和茄尼醇含量的影響
        4.3.2 H₂O₂處理對茄尼醇關鍵酶基因表達量的影響
結論
參考文獻
攻讀學位期間公開發(fā)表的論文
附錄
致謝



本文編號：3992462