由柄銹菌(Puccinia helianthi Schw.)引起的向日葵銹病是發(fā)生在向日葵上重要的真菌病害之一,嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響品質(zhì)及含油量。MicroRNA(miRNA)是植物體內(nèi)普遍存在的一種非編碼單鏈小RNA,參與調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育及多種逆境脅迫響應(yīng)。針對(duì)向日葵抗病相關(guān)miRNA這一研究的空白,本試驗(yàn)構(gòu)建銹病脅迫下向日葵small RNA文庫(kù),通過(guò)Solexa高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析篩選與抗病顯著相關(guān)的miRNA;利用實(shí)時(shí)熒光定量(qRT-PCR)技術(shù)對(duì)10個(gè)抗病相關(guān)的miRNA進(jìn)行定量驗(yàn)證,并利用miRanda軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè);挑選其中的4個(gè)抗病相關(guān)的miRNA構(gòu)建miRNA的植物表達(dá)載體。這為深入研究向日葵miRNA抗病分子機(jī)制及進(jìn)一步研究向日葵抗病相關(guān)miRNA的功能奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.用高通量測(cè)序技術(shù)預(yù)測(cè)分析了向日葵miRNA,在其全基因組中共發(fā)現(xiàn)了 378個(gè)miRNA,其中373個(gè)是新發(fā)現(xiàn)的miRNA,新預(yù)測(cè)的miRNA中有13個(gè)miRNA是對(duì)照組(A)、抗病組(B)、感病組(C)三組材料中差異表達(dá)的。樣品A和樣品B之間共有8個(gè)差異表達(dá)基因,樣品B和樣品C之間...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１文庫(kù)構(gòu)建原理圖??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｌｉｂｒａｒｙ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ??

下向日葵ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ文庫(kù)構(gòu)建及Ｓｏｌｅｘａ高通量測(cè)序??２．４．１文庫(kù)構(gòu)建及測(cè)序??檢測(cè)向日葵對(duì)照和病害處理葉片的總ＲＮＡ，質(zhì)量合格后用ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ?Ｓａｍｐｌｅ??Ｐｒｅ?Ｋｉｔ來(lái)構(gòu)建其文庫(kù)，以總ＲＮＡ為起始樣品，ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ的３’端加上接頭，添??加反轉(zhuǎn)錄引....

圖２向日蔡對(duì)照和病害脅迫下ｃｌｅａｎ?ｒｅａｄｓ和ｍｉＲＮＡ的長(zhǎng)度分布??

ｗｎ?２０２１８３７?１６５５２５４?１８１５５５２?８８．１７?８７．６２?８７．５３??ｎｃＲＮＡ?５８８８?５０７２?７９８９９?２６?０．２７?３．８６??ｃｌｅａｎ?ｒｅａｄｓ?２２９３１３５?１８９１４４６?２０７３３５９?１００?１００?１００??３．２向日葵抗病相....

圖３向日葵已知和新預(yù)測(cè)ｍｉＲＮＡ各位點(diǎn)的堿基分布圖??

?向日葵銹病抗性相關(guān)ＭｉｃｒｏＲＮＡ的挖掘及表達(dá)載體的構(gòu)建???３．２．２基于ｍｉＲＮＡ成熟序列的堿基偏好性篩選??因?yàn)橹参铮恚椋遥危恋那绑w在細(xì)胞核中形成，然后運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)中，由ＤＣＬ１??酶酶切處理后，形成成熟的ｍｉＲＮＡｓ，這種酶切位點(diǎn)的特異性使得ｍｉＲＮＡ序列??首位對(duì)Ｕ具....

圖５向日葵葉片的總ＲＮＡ凝膠電泳??Ｆｉ．５?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ?ｌｅａｖｅｓ??

蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???接上表９???３１?Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｅｘｃｉｓｉｏｎ?ｒｅｐａｉｒ?０．２８４２６?ｋｏ０３４２０??３２?ｍＲＮＡ?ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ?ｐａｔｈｗａｙ?０．２９６０５?ｋｏ０３０１５??３３?Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ?０．４０７４６?ｋｏ....

本文編號(hào)：4002542