家蠶（Bombyx mori）是一種重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲,屬于鱗翅目完全變態(tài)昆蟲,常作為鱗翅目昆蟲的模式生物用于相關(guān)基礎(chǔ)研究。家蠶入眠蛻皮是其生長、發(fā)育、變態(tài)的重要生理過程之一,是在其長期進(jìn)化中形成的遺傳特性。本課題研究對象是一種2齡不眠蠶(non-molting in the 2^nd instar,nm2)突變體,突變體大多數(shù)表現(xiàn)為2齡末期不入眠、不蛻皮、極少進(jìn)食,維持此狀態(tài)一周左右后相繼死亡。前期研究已經(jīng)確定BmCPG10是引起nm2突變的主效基因。本研究在前期的研究基礎(chǔ)上,利用CRISPR/Cas9技術(shù)、數(shù)字基因表達(dá)譜（Digital Gene Expression,DGE）以及雙向電泳技術(shù)對BmCPG10基因及相關(guān)基因的功能進(jìn)行更為系統(tǒng)、詳細(xì)的分析,以闡述該突變體發(fā)生的分子機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:第一,利用CRISPR/Cas9編輯技術(shù)對BmCPG10基因的功能進(jìn)行分析。在BmCPG10基因的1號外顯子上選取合適的靶位點(diǎn)體外合成sgRNA,與Cas9蛋白混合注射到家蠶的早期胚胎中,經(jīng)檢測,有2頭蠶在靶位點(diǎn)均出現(xiàn)4個(gè)堿基的缺失,其中一頭蠶在2齡末期死亡,另一頭為雄... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 選題背景和選題意義
    1.2 昆蟲眠性的調(diào)控
        1.2.1 蛻皮激素相關(guān)基因?qū)γ咝缘挠绊?br>        1.2.2 保幼激素相關(guān)基因?qū)γ咝缘挠绊?br>        1.2.3 神經(jīng)肽基因?qū)γ咝缘挠绊?br>    1.3 主要研究內(nèi)容
        1.3.1 CRISPR/Cas9 技術(shù)編輯Bm CPG10 基因
        1.3.2 數(shù)字基因表達(dá)譜DGE分析差異基因
        1.3.3 前胸腺中差異蛋白的2-DE分析
    1.4 技術(shù)路線圖
第2章 基于CRISPR/Cas9 技術(shù)分析Bm CPG10 基因的功能
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建
        2.3.2 細(xì)胞水平檢測驗(yàn)證編輯情況
        2.3.3 家蠶個(gè)體水平驗(yàn)證編輯情況
        2.3.4 BmCPG10 在編輯蠶中的上調(diào)表達(dá)
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 家蠶突變體nm2 將眠期頭部的DGE分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.5 實(shí)驗(yàn)引物
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 DGE數(shù)據(jù)基本情況
        3.3.2 DGE數(shù)據(jù)分析
        3.3.3 差異表達(dá)基因分析
        3.3.4 qRT-PCR驗(yàn)證測序數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性
        3.3.5 Bm CPG10在nm2 中上調(diào)表達(dá)
        3.3.6 DGE部分差異表達(dá)基因分析
        3.3.7 保幼激素合成相關(guān)差異表達(dá)基因分析
        3.3.8 蛻皮激素合成相關(guān)差異表達(dá)基因分析
        3.3.9 幾丁質(zhì)合成相關(guān)差異表達(dá)基因分析
        3.3.10 表皮蛋白基因差異表達(dá)分析
        3.3.11 核受體基因差異表達(dá)分析
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 家蠶表皮蛋白Bm CPR41在nm2 中顯著上調(diào)表達(dá)
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.5 實(shí)驗(yàn)引物
    4.3 結(jié)果與分析
W的2-DE分析">        4.3.1 野生型及nm2 突變體家蠶PG^W的2-DE分析
        4.3.2 表達(dá)差異蛋白點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定
        4.3.3 Bm CPR41 基因在nm2 突變體和野生型家蠶中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)差異
        4.3.4 Bm CPR41 基因的組織表達(dá)譜
        4.3.5 Bm CPR41 在編輯蠶中的表達(dá)情況
        4.3.6 BmCP-like在編輯蠶中的表達(dá)情況
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組編輯技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 孫玉章,孫明軍,代永聯(lián),尹仁福,丁壯.  中國動(dòng)物檢疫. 2016(12)
[2]家蠶2齡不眠蠶突變體的發(fā)現(xiàn)及遺傳特性分析[J]. 趙巧玲,吳凡,夏定國,裘智勇,沈興家.  蠶業(yè)科學(xué). 2015(03)
[3]家蠶二化性品種(品系)轉(zhuǎn)基因用蠶卵的預(yù)處理技術(shù)研究[J]. 唐順明,沈興家,趙巧玲,章?lián)P,張國政,郭錫杰.  蠶業(yè)科學(xué). 2009(04)
[4]昆蟲蛻皮的激素調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[J]. 郭恩恩,李勝,曹陽.  蠶業(yè)科學(xué). 2008(02)
[5]昆蟲蛻皮的分子機(jī)理及應(yīng)用[J]. 趙小凡.  昆蟲知識. 2007(03)
[6]動(dòng)物體內(nèi)膽固醇的生物合成[J]. М.И.Прохора,С.Ю.Туманоа,顧煥斌.  生理科學(xué)進(jìn)展. 1965(02)

博士論文
[1]家蠶新突變體二齡不眠蠶基因的定位克隆及功能研究[D]. 吳凡.江蘇科技大學(xué) 2016
[2]桔小實(shí)蠅幾丁質(zhì)和保幼激素合成與代謝中重要基因的研究[D]. 楊文佳.西南大學(xué) 2014

碩士論文
[1]家蠶PTTH基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控及相關(guān)神經(jīng)肽的發(fā)育表達(dá)[D]. 于淼.合肥工業(yè)大學(xué) 2010



本文編號：2905088