發(fā)布時(shí)間：2020-11-21 04:18

　　 目的:本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建大鼠膿毒癥心肌損傷模型,探究心肌線粒體UCP2過表達(dá)對(duì)膿毒癥心肌線粒體動(dòng)力學(xué)(Drp1、Opal、Fis1蛋白表達(dá)水平)及線粒體功能的影響,從在體心肌線粒體水平探討UCP2過表達(dá)對(duì)膿毒癥心肌損傷潛在的保護(hù)機(jī)制。方法:40只SD雄性大鼠,按隨機(jī)分為4組:Control組(假CLP組)、Sham組(假轉(zhuǎn)染手術(shù)組)、AAV組(單純腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染組)、UCP2組(UCP2過表達(dá)組)。通過盲腸結(jié)扎穿孔建立膿毒癥心肌損傷大鼠模型,用超聲心動(dòng)圖檢測大鼠心臟功能、Elisa檢測大鼠心肌損傷相關(guān)指標(biāo)以鑒定膿毒癥心肌損傷模型。用UCP2腺相關(guān)病毒感染SD大鼠心肌,Western blot檢測心臟組織中UCP2的表達(dá)變化,熒光顯微鏡觀察UCP2組轉(zhuǎn)染情況。電鏡觀察心肌線粒體超微結(jié)構(gòu),DHE檢測ROS的產(chǎn)生,ATP試劑盒檢測ATP的產(chǎn)生。Western blot檢測心肌組織中Drp1、Opa1、Fis1相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.建立CLP模型后,LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs、LVEF、LVFS明顯升高(P0.05)。LVIDd、LVIDs、LVESV、LVEDV明顯降低(P0.05)。血清IL-6、TNF-α、CK、CTn-I、LDH水平明顯上升(P0.05),且大鼠出現(xiàn)明顯膿毒癥癥狀,膿毒癥心肌損傷模型建立成功。2.UCP2組UCP2蛋白水平明顯高于其余三組(P0.05),且能觀察到綠色熒光,UCP2過表達(dá)模型建立成功。3.UCP2組較Sham組和AAV組LVAWs、LVEF、LVFS顯著降低(P0.05),LVIDs、LVESV上升(P0.05),血清IL-6、TNF-α、CK、CTn-I、LDH水平明顯降低(P0.05),且線粒體超微結(jié)構(gòu)明顯改善,ROS產(chǎn)生顯著減少(P0.05),ATP生成增加(P0.05)。4.Control組、Sham組、AAV組及UCP2組心肌組織樣本中Opa1、Fis1蛋白表達(dá)水平無明顯差異(P0.05)。建立CLP模型后,Sham組和AAV組Drp1蛋白表達(dá)水平較Control組顯著上升(P0.05),但當(dāng)UCP2過表達(dá)后,心肌組織中Drp1表達(dá)水平均較Sham組、AAV組降低(P0.05)。結(jié)論:1.UCP2過表達(dá)能在一定程度上改善膿毒癥心肌收縮功能異常;2.UCP2過表達(dá)能改善膿毒癥心肌損傷線粒體功能障礙。3.UCP2過表達(dá)使ROS生成減少,降低Drp1蛋白的表達(dá),通過抑制線粒體分裂,進(jìn)而調(diào)控線粒體動(dòng)力學(xué),改善線粒體功能,發(fā)揮心肌保護(hù)的作用。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

19圖 2 CLP 建模后大鼠癥狀 A.CLP 模型建立后大鼠出現(xiàn)膿尿；B.CLP 模型建立后大鼠出現(xiàn)稀便；C.CLP 模型建立后大鼠眼鼻分泌物增多 2.2 大鼠 CLP 建模后腹腔情況解剖見 Control 組大鼠腹腔無異常 與 Control 組相比，Sham AAV 和 UCP2 組解剖見結(jié)扎部分盲腸呈紫黑色，腫脹，脆性增加，周圍腸腔有膿性滲出，惡臭，腸管

立膿毒癥模型后各組大鼠腹腔情況 與 Control 組比 Sham 組 AAV 組 UCP2 組大顯變化 鼠心肌轉(zhuǎn)染 UCP2 腺相關(guān)病毒射 UCP2 腺相關(guān)病毒 3 周后，冰凍切片，可在 UCP2 組觀察到綠色熒光Western blot 檢測四組大鼠心肌 UCP2 蛋白表達(dá)，Sham 組 AAV 組 UCP高于 Control 組τP<0.05υ，且 UCP2 組蛋白的表達(dá)量高于其余三組τP<0UCP2 過表達(dá)模型成功建立 結(jié)果見圖 4B C BC

圖 3 建立膿毒癥模型后各組大鼠腹腔情況 與 Control 組比 Sham 組 AAV 組 UCP2 組大鼠腹腔出現(xiàn)明顯變化 2.3 大鼠心肌轉(zhuǎn)染 UCP2 腺相關(guān)病毒注射 UCP2 腺相關(guān)病毒 3 周后，冰凍切片，可在 UCP2 組觀察到綠色熒光，見圖4A Western blot 檢測四組大鼠心肌 UCP2 蛋白表達(dá)，Sham 組 AAV 組 UCP2 蛋白表達(dá)量高于 Control 組τP<0.05υ，且 UCP2 組蛋白的表達(dá)量高于其余三組τP<0.05υ 說明 UCP2 過表達(dá)模型成功建立 結(jié)果見圖 4B C BA
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