發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 21:12

　　 背景隨著基因測(cè)序技術(shù)在尿液微生物檢測(cè)方面的應(yīng)用,傳統(tǒng)的“膀胱無(wú)菌”概念已被打破。而且,越來(lái)越多的研究表明尿液微生態(tài)在疾病的發(fā)生與發(fā)展中扮演著重要角色。T2DM患者尿糖和尿液pH值的升高,引起了尿液微生物生存環(huán)境的改變,這一改變導(dǎo)致患者頻發(fā)尿路感染。女性患者因尿道解剖位置的特殊性,較男性更易發(fā)生尿路感染。因此,女性患者尿液微生態(tài)結(jié)構(gòu)較男性可能更易發(fā)生改變。IL-8是趨化因子家族的一種細(xì)胞因子,已被用于診斷膀胱炎癥。機(jī)體其它部位微生態(tài)的研究表明,微生態(tài)紊亂與局部組織炎癥反應(yīng)相關(guān)。所以,尿液IL-8的出現(xiàn)與否可能也與尿液微生態(tài)有關(guān)。眾所周知,科學(xué)飲食對(duì)于T2DM患者具有延緩病情作用,這與它對(duì)腸道微生態(tài)及其免疫功能的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。由于尿液成分主要由飲食決定,其調(diào)節(jié)效應(yīng)可能也將發(fā)生于尿液微生態(tài)與膀胱炎癥反應(yīng)之間。如需證明此假設(shè),首先需探討一種適宜微生態(tài)研究的尿標(biāo)本采集法。目的1.探討一種改良式尿液微生態(tài)標(biāo)本采集法(下簡(jiǎn)稱(chēng)“改良法”),避免導(dǎo)尿術(shù)采集法給患者帶來(lái)的痛苦,并為尿液微生態(tài)檢測(cè)的臨床應(yīng)用提供一項(xiàng)新的護(hù)理技術(shù)。2.探討女性T2DM患者尿液微生態(tài)多樣性特征,并了解患者尿液微生態(tài)是否受個(gè)體特征如血糖、尿糖和年齡等因素影響。3.探討T2DM患者尿液微生態(tài)變化與尿液IL-8濃度的關(guān)系。4.探討飲食對(duì)T2DM患者尿液微生態(tài)與尿液IL-8濃度相關(guān)性的調(diào)節(jié)效應(yīng)。方法1.自行設(shè)計(jì)的改良法包括:①指導(dǎo)患者學(xué)習(xí)導(dǎo)尿術(shù)消毒法;②患者下蹲,自行取碘伏棉球消毒會(huì)陰部及尿道口,持續(xù)分開(kāi)陰唇,排尿時(shí)依次采用4根標(biāo)有1、2、3和4的50mL無(wú)菌離心管接尿。采用自身前后對(duì)照研究設(shè)計(jì),采集了 30名擬行留置導(dǎo)尿術(shù)的剖宮術(shù)女性志愿者尿標(biāo)本,即于術(shù)前一日采用改良法采集標(biāo)本,手術(shù)當(dāng)日采用導(dǎo)尿術(shù)采集標(biāo)本。將管2和管3尿液用于微生態(tài)檢測(cè)和尿培養(yǎng),采用磁珠法提取細(xì)菌DNA和Miseq測(cè)序平臺(tái)對(duì)細(xì)菌16S rDNA高可變區(qū)V3-V4進(jìn)行測(cè)序,使用R語(yǔ)言和STAMP軟件進(jìn)行生物信息與統(tǒng)計(jì)分析,以比較改良法與導(dǎo)尿術(shù)所采集尿標(biāo)本的微生態(tài)。2.應(yīng)用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì),招募了 70名女性T2DM患者及70名健康女性作為對(duì)照組。利用改良法采集尿標(biāo)本,細(xì)菌DNA的提取和測(cè)序分析方法同第一部分研究,比較T2DM患者與健康女性尿液微生態(tài)多樣性特征和結(jié)構(gòu),并分析年齡、血糖、尿糖、BMI和月經(jīng)等個(gè)體特征對(duì)患者微生態(tài)的影響。3.使用第二部分研究中采用改良法采集的尿標(biāo)本,采用ELISA試劑盒檢測(cè)尿液IL-8濃度。接下來(lái),根據(jù)檢測(cè)結(jié)果將T2DM患者分為兩組:有可檢測(cè)的IL-8(with detectable IL-8,WIL8)組與無(wú)可檢測(cè)的 IL-8(no detectable IL-8,NIL8)組。比較WIL8與NIL8組尿液微生態(tài)是否存在組間差異。同時(shí),將第二部分研究所探知的T2DM組與健康組有組間差異的細(xì)菌屬分為某一特定細(xì)菌屬的“≥ HCs”和“HCs”亞組,繼而比較兩個(gè)亞組之間尿液IL-8濃度差異。另外,采用多元逐步回歸分析判斷與IL-8濃度變化有線性回歸關(guān)系的細(xì)菌屬。4.采用入戶調(diào)查方式和《飲食頻率法調(diào)查表》調(diào)查患者飲食攝入情況,使用Matlab軟件按《食物成分表》將飲食轉(zhuǎn)換為營(yíng)養(yǎng)素。將第二部分研究中揭示的T2DM組與健康組存在組間差異的細(xì)菌屬和細(xì)菌種、第三部分研究中證實(shí)的WIL8與NIL8組存在組間差異的細(xì)菌屬和細(xì)菌種及與IL-8濃度具有回歸關(guān)系的細(xì)菌屬作為自變量,將尿液IL-8濃度作為因變量,將第二部分研究中證實(shí)的尿液微生態(tài)影響因素作為控制變量,采用分層回歸分析方法進(jìn)行調(diào)節(jié)效應(yīng)分析。結(jié)果1.改良法與導(dǎo)尿術(shù)采集法的尿液標(biāo)本微生態(tài)在菌群多樣性特征及菌群的門(mén)、科和屬水平無(wú)組間差異(p0.05)。同時(shí),兩種采集法的標(biāo)本微生態(tài)在門(mén)、科和屬水平相似度均接近100%。2.女性T2DM患者尿液微生態(tài)發(fā)生了以下變化:①與健康女性相比,患者尿液微生態(tài)豐富度和多樣性指數(shù)均下降(p0.05);②微生態(tài)群落在細(xì)菌門(mén)、屬和種水平發(fā)生了明顯變化,主要表現(xiàn)在:與健康對(duì)照組相比,T2DM組細(xì)菌門(mén)綠彎菌、硝化螺旋菌和疣微菌相對(duì)豐度下降(p0.05);33個(gè)細(xì)菌屬的相對(duì)豐度在組間呈現(xiàn)差異(P0.05),如普氏菌、乳桿菌和Shuttleworthia(暫無(wú)中文名,則采用英文名;根據(jù)國(guó)際慣例,細(xì)菌屬和種水平采用斜體字。余同)相對(duì)豐度在T2DM組明顯升高,而阿克曼氏菌、Faecalibacterium和銅綠假單胞菌相對(duì)豐度則在T2DM組降低;嗜黏蛋白阿克曼氏菌相對(duì)豐度在T2DM組明顯降低;③放線菌門(mén)、卟啉單胞菌、黃桿菌目、脫硫弧菌、黃桿菌綱和柯林斯氏菌可作為T(mén)2DM生物標(biāo)識(shí)物;④乳桿菌和放線菌門(mén)相對(duì)豐度隨著血糖及尿糖的升高而升高,嗜黏蛋白阿克曼氏菌相對(duì)豐度則隨著血糖和尿糖的升高而降低;⑤T2DM尿液微生態(tài)多樣性指數(shù)Chao 1和ACE與碳水化合物及氨基酸代謝功能受損有關(guān)。3.70個(gè)標(biāo)本中有46名患者的尿標(biāo)本可檢測(cè)出IL-8(濃度為64.31 ± 70.43 pg/mL),24名患者無(wú)可檢測(cè)的IL-8。11個(gè)細(xì)菌屬在WIL8組升高(p0.05),如棒狀桿菌、阿克曼氏菌和腸球菌等;10個(gè)細(xì)菌屬在WIL8組下降,如Faecalibacterium、擬桿菌和銅綠假單胞菌等(p0.05)。惰性乳桿菌在WIL8組升高(p0.05)。T2DM組與健康組間差異細(xì)菌屬中,有4個(gè)細(xì)菌屬在“≥ HCs”和“HCs”亞組的IL-8濃度有差異(p0.05),它們是不動(dòng)桿菌、克雷白氏菌、銅綠假單胞菌和細(xì)桿菌。IL-8濃度變化與18個(gè)細(xì)菌屬有線性回歸關(guān)系(p0.05)。4.纖維素、VitB3和VitE攝入量對(duì)瘤胃球菌相對(duì)豐度與IL-8濃度起到正向調(diào)節(jié)效應(yīng),但飲水量為負(fù)向調(diào)節(jié)效應(yīng)(p0.05);膽固醇和鎂攝入量對(duì)叢毛單胞菌相對(duì)豐度與IL-8濃度相關(guān)性起正向調(diào)節(jié)效應(yīng)(p0.05);Vit A攝入量對(duì)厭氧球菌相對(duì)豐度與IL-8濃度相關(guān)性起到負(fù)向調(diào)節(jié)效應(yīng)(p0.05)。結(jié)論1.改良法可采集到不易污染的真正中段尿。它可替代導(dǎo)尿術(shù)標(biāo)本采集法,用于尿液微生態(tài)及尿培養(yǎng)標(biāo)本的采集。2.女性T2DM患者尿液微生態(tài)發(fā)生了紊亂,其個(gè)體特征如血糖和尿糖值與某些關(guān)鍵功能菌的變化有關(guān)。同時(shí),微生態(tài)紊亂與代謝紊亂相關(guān)。3.女性T2DM患者尿液微生態(tài)紊亂與膀胱炎癥反應(yīng)互為影響。4.飲食對(duì)尿液微生態(tài)與膀胱炎癥反應(yīng)可發(fā)揮調(diào)節(jié)效應(yīng)。今后,護(hù)理人員可通過(guò)調(diào)整患者飲食方案以增加Vit A、Vit B3、Vit E與膳食纖維攝入量,以促進(jìn)膀胱炎癥反應(yīng)的緩解。同時(shí),護(hù)理人員宜動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患者水、膽固醇和鎂攝入量,以防止它們的過(guò)度攝入引起的膀胱炎癥反應(yīng)加重。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R473.5
【部分圖文】：

３．３?ＭＭＳＵ與ＴＵＣ采集法尿液微生態(tài)結(jié)果比較??３．３．１?ＭＭＳＵ與ＴＵＣ采集法微生態(tài)復(fù)雜度比較??從ＰＣｏＡ分析可以看出，兩組樣本完全不可聚類(lèi)，且大部分樣本重疊（圖１．１）。??從表１．４可知，ＭＭＳＵ與ＴＵＣ標(biāo)本微生態(tài)復(fù)雜度指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ｐ＞０．０５）。??ＰＣＡ??２０?４?？??｜?Ｕｒ２５Ｂ??３？??〇〇?Ｇｒｏｕｐ??＾?釋?ＭＭＳＵ??ｃｏ?Ｒ?ＴＵＣ??＾?－２０－??－４０－??Ｉ??????Ｕｒ？ＳＩ??－４０?－２０?０??ＰＣ１?７．０２％??圖１．１?ＰＣｏＡ分析??ＰＣｏＡ分析，是微生態(tài)樣品間差異分析結(jié)果，基于ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ?ＵｎｉＦｒａｃ?ｍｅｔｒｉｃ進(jìn)行分??析。紅點(diǎn)代表ＭＭＳＵ組，藍(lán)點(diǎn)代表ＴＵＣ組。??２４??

１３．２．１．１?ＭＭＳＵ與丁?ＵＣ組菌群門(mén)水平比較??在菌群分類(lèi)學(xué)分析中發(fā)現(xiàn)有１９個(gè)細(xì)菌門(mén)（ｐｈｙｌｕｍ），?ＭＭＳＵ與ＴＵＣ采集法在門(mén)??水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ｐ＞〇．〇５），詳見(jiàn)圖１．２。??１００??ｍ?ＭＭＳＵ?ｐ＞〇．〇５??＿?ＴＵＣ??Ｊ??８０－??２?ＳＤ??ｖ）?６０－??ａ＞?，?４??ｏ??ｃ??Ｑ＞??Ｄ??？??（Ｏ??ｃ??ＪＯ??〇．?４０－??〇Ｉ??圖１．２?ＭＭＳＵ與ＴＵＣ法菌群門(mén)水平細(xì)菌豐度比較??采用ＳＴＡＭＰ軟件分析兩組菌群門(mén)水平相對(duì)豐度差異，利用Ｗｅｌｃｈ’ｓ?ｔ檢驗(yàn)，采用??ＢｅｎｊａｍｉｎｉＦＤＲ進(jìn)行校正。黃色代表ＭＭＳＵ組，綠色代表ＴＵＣ組。??２６??

?正文第一部分改良式中段尿與導(dǎo)尿術(shù)尿標(biāo)本采集法對(duì)尿液微生態(tài)的影響??３．３．２．１．２ＭＭＳＵ與ＴＵＣ菌群門(mén)水平相似度??從圖１．３可知，兩種采集方法的微生態(tài)在菌群門(mén)水平Ｒ２＝０．９９１�？梢�(jiàn)，ＭＭＳＵ??采集法尿液微生態(tài)與ＴＵＣ采集法在門(mén)水平相似度高｜１３３］。??１?５??，?！?！?７１??Ｒ２?＝０．９９１?，??６０??／??Ｉ??／??／??／??／??５０?＾??／??／??／??／??／??／??４０?／?－??／??／??一?ｚ??２?３０?＾??／??／??／??２０??－—ｒ?＾?］??１０?（卜一＾???／??〇?—????／??——???１??０?１０?２０?３０?４０?５０?６０?０?１５??ＭＭＳＵ?（％）??圖１．３?ＭＭＳＵ與ＴＵＣ組菌群門(mén)水平相似度??Ｓｃａｔｔｅｒ圖采用ＳＴＡＭＰ軟件分析生成，兩組菌群細(xì)菌門(mén)豐度可信區(qū)間采用Ｗｉｓｏｎ??ｓｃｏｒｅ方法計(jì)算。??２７??
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本文編號(hào)：2892001