本文關(guān)鍵詞：高效石油降解菌的篩選及石油污染土壤生物修復(fù)特性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

4期徐金蘭等:高效石油降解菌的篩選及石油污染土壤生物修復(fù)特性的研究623

壤中投加環(huán)境適應(yīng)強(qiáng)、降解效能高的菌種或菌群是提高石油污染土壤生物修復(fù)效率的主要手段.在這方面已取得一定的研究成果,例如美國(guó)BGI公司的一項(xiàng)專利技術(shù)就是利用混合菌群來促進(jìn)石油烴的降解(BalticGeneralInvestmentCorporation,1996);Wilson等的論文中也報(bào)道了幾種對(duì)PAHs發(fā)揮高效降解能力的菌株(Wilsonetal,1993).但污染土壤的

石油降解菌的復(fù)篩:稱取含油土樣50g,溶于經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基100mL中,配成泥漿,盛于250mL的三角瓶中;在無菌條件下,將制好的菌懸液接種2mL于三角瓶中,各菌種均做3個(gè)平行樣,并作加氯化汞殺菌和不加菌2種空白對(duì)照.在30℃、160r min條件下于搖床中培養(yǎng).每2d取1次樣,測(cè)其石油烴含量,直至其石油烴含量不再有明顯變化,篩選出石油烴降解率高的菌種.接種量影響試驗(yàn)的操作方法與菌種復(fù)篩的方法相同,不同的是改變接種量和試驗(yàn)土樣.樣點(diǎn)1、樣點(diǎn)2、樣點(diǎn)3、樣點(diǎn)4的泥漿中石油

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烴濃度分別為125mg L、mg L、3245

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mg L、209mg L.

2kg于,23、SY43進(jìn)行活化,與(,接入石油污染20%左右,在自然.2.4　測(cè)試項(xiàng)目及方法

石油烴的測(cè)定:采用非分散紅外石油儀測(cè)定(中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T1648821996,1996).

微生物計(jì)數(shù):采用平板計(jì)數(shù)測(cè)定泥漿中石油降解菌的數(shù)量(俞毓馨等,1990).33.1

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微生物修復(fù)是一項(xiàng)涉及污染物特性、微生物生態(tài)結(jié)構(gòu)和環(huán)境條件的復(fù)雜系統(tǒng)工程,高效降油菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性及其對(duì)石油的分解特性都會(huì)影響生物修復(fù)過程.本文從陜北石油污染土樣中篩選高效降油菌株,對(duì)其形態(tài)及生理特征進(jìn)行研究,并進(jìn)行初步鑒定;研究菌株的除油特性及部分菌株的生物修復(fù)過程,以期為工程實(shí)際提供理論依據(jù).22.1

材料和方法(Materialsandmethods)

原油和石油污染土壤

,,其特性見表1表1

Table1

采集石油污染土壤的特性

Thecharacteristicsofoil2contaminatedsoil

編號(hào)樣點(diǎn)1樣點(diǎn)2樣點(diǎn)3樣點(diǎn)4

總烴濃度/(mg kg-1)

20914828100572

細(xì)菌數(shù)量/(個(gè) g-1)

pH

含水率

好氧細(xì)菌

石油降解菌

1.3×1035.6×1032.2×1041.0×105

結(jié)果(Results)

8.898.3%9.2×1031.3×1054.4×1043.4×105

8.6615.5%8.5513.9%8.9115.1%

高效降油菌的篩選

為了取得高效、徹底的生物修復(fù)效果,分離和篩選污染物的高效降解菌種是生物修復(fù)的必然要求.本試驗(yàn)從陜北長(zhǎng)慶油田石油污染土壤中共獲得60個(gè)試樣,經(jīng)過3次富集培養(yǎng)以及分離純化等步驟

2.2　培養(yǎng)基

培養(yǎng)基:NH4NO32g,K2HPO41.5g,KH2PO43g,MgSO4 70H2O0.1g,無水CaCl20.01g,Na2EDTA 2H2O0.01g,原油1g,蒸餾水:1000mL,pH值7.2～7.4.2.3　操作方法

石油降解菌的富集、分離、純化:取一定量的石油污染土樣接入裝有100mL培養(yǎng)基的250mL三角

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瓶中,于30℃、160r min條件下在搖床中培養(yǎng)7d;然后取一定量的上述培養(yǎng)液接入裝有100mL新鮮培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,30℃、160r min條件下?lián)u床中培養(yǎng)7d;如此共3次.用接種環(huán)沾取富集培養(yǎng)液于平板上劃線;經(jīng)過多次劃線純化后,將純化菌株于試管斜面培養(yǎng)后保存于冰箱(梁生康等,2004).

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得到45個(gè)單菌株.在此基礎(chǔ)上,采用降解石油試驗(yàn),復(fù)篩出7株對(duì)石油具有較高降解能力的菌株.表2列出了這7株菌在石油培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況、培養(yǎng)7d時(shí)細(xì)菌密度、細(xì)菌除油率及菌落生長(zhǎng)特征.從表2可以看出,7株菌在石油培養(yǎng)基介質(zhì)中生長(zhǎng)良好,對(duì)原油可產(chǎn)生一定乳化作用;培養(yǎng)7d時(shí)的細(xì)菌密度可

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達(dá)10～10個(gè) mL,表明7株菌可以利用石油為唯一碳源生長(zhǎng);培養(yǎng)7d后的生物除油率為43.8%～58.9%,高于石油降解菌B01對(duì)勝利油田石油類的降解率(25.8%～32.8%)(林鳳翱等,1997),與O2823假單胞菌屬、海洋細(xì)菌SJ206W、SJ26及SJ216A22對(duì)石油類的降解率相當(dāng)(40.89%～57.65%)(梁生康等,2004;丁明宇等,2001).

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