本文關鍵詞：高效石油降解菌的篩選及石油污染土壤生物修復特性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

4期徐金蘭等:高效石油降解菌的篩選及石油污染土壤生物修復特性的研究623

壤中投加環(huán)境適應強、降解效能高的菌種或菌群是提高石油污染土壤生物修復效率的主要手段.在這方面已取得一定的研究成果,例如美國BGI公司的一項專利技術就是利用混合菌群來促進石油烴的降解(BalticGeneralInvestmentCorporation,1996);Wilson等的論文中也報道了幾種對PAHs發(fā)揮高效降解能力的菌株(Wilsonetal,1993).但污染土壤的

石油降解菌的復篩:稱取含油土樣50g,溶于經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基100mL中,配成泥漿,盛于250mL的三角瓶中;在無菌條件下,將制好的菌懸液接種2mL于三角瓶中,各菌種均做3個平行樣,并作加氯化汞殺菌和不加菌2種空白對照.在30℃、160r min條件下于搖床中培養(yǎng).每2d取1次樣,測其石油烴含量,直至其石油烴含量不再有明顯變化,篩選出石油烴降解率高的菌種.接種量影響試驗的操作方法與菌種復篩的方法相同,不同的是改變接種量和試驗土樣.樣點1、樣點2、樣點3、樣點4的泥漿中石油

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烴濃度分別為125mg L、mg L、3245

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mg L、209mg L.

2kg于,23、SY43進行活化,與(,接入石油污染20%左右,在自然.2.4　測試項目及方法

石油烴的測定:采用非分散紅外石油儀測定(中華人民共和國國家標準GB/T1648821996,1996).

微生物計數(shù):采用平板計數(shù)測定泥漿中石油降解菌的數(shù)量(俞毓馨等,1990).33.1

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微生物修復是一項涉及污染物特性、微生物生態(tài)結(jié)構(gòu)和環(huán)境條件的復雜系統(tǒng)工程,高效降油菌對環(huán)境的適應性及其對石油的分解特性都會影響生物修復過程.本文從陜北石油污染土樣中篩選高效降油菌株,對其形態(tài)及生理特征進行研究,并進行初步鑒定;研究菌株的除油特性及部分菌株的生物修復過程,以期為工程實際提供理論依據(jù).22.1

材料和方法(Materialsandmethods)

原油和石油污染土壤

,,其特性見表1表1

Table1

采集石油污染土壤的特性

Thecharacteristicsofoil2contaminatedsoil

編號樣點1樣點2樣點3樣點4

總烴濃度/(mg kg-1)

20914828100572

細菌數(shù)量/(個 g-1)

pH

含水率

好氧細菌

石油降解菌

1.3×1035.6×1032.2×1041.0×105

結(jié)果(Results)

8.898.3%9.2×1031.3×1054.4×1043.4×105

8.6615.5%8.5513.9%8.9115.1%

高效降油菌的篩選

為了取得高效、徹底的生物修復效果,分離和篩選污染物的高效降解菌種是生物修復的必然要求.本試驗從陜北長慶油田石油污染土壤中共獲得60個試樣,經(jīng)過3次富集培養(yǎng)以及分離純化等步驟

2.2　培養(yǎng)基

培養(yǎng)基:NH4NO32g,K2HPO41.5g,KH2PO43g,MgSO4 70H2O0.1g,無水CaCl20.01g,Na2EDTA 2H2O0.01g,原油1g,蒸餾水:1000mL,pH值7.2～7.4.2.3　操作方法

石油降解菌的富集、分離、純化:取一定量的石油污染土樣接入裝有100mL培養(yǎng)基的250mL三角

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瓶中,于30℃、160r min條件下在搖床中培養(yǎng)7d;然后取一定量的上述培養(yǎng)液接入裝有100mL新鮮培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,30℃、160r min條件下?lián)u床中培養(yǎng)7d;如此共3次.用接種環(huán)沾取富集培養(yǎng)液于平板上劃線;經(jīng)過多次劃線純化后,將純化菌株于試管斜面培養(yǎng)后保存于冰箱(梁生康等,2004).

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得到45個單菌株.在此基礎上,采用降解石油試驗,復篩出7株對石油具有較高降解能力的菌株.表2列出了這7株菌在石油培養(yǎng)基中的生長狀況、培養(yǎng)7d時細菌密度、細菌除油率及菌落生長特征.從表2可以看出,7株菌在石油培養(yǎng)基介質(zhì)中生長良好,對原油可產(chǎn)生一定乳化作用;培養(yǎng)7d時的細菌密度可

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達10～10個 mL,表明7株菌可以利用石油為唯一碳源生長;培養(yǎng)7d后的生物除油率為43.8%～58.9%,高于石油降解菌B01對勝利油田石油類的降解率(25.8%～32.8%)(林鳳翱等,1997),與O2823假單胞菌屬、海洋細菌SJ206W、SJ26及SJ216A22對石油類的降解率相當(40.89%～57.65%)(梁生康等,2004;丁明宇等,2001).

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