蝗綠僵菌作為專一性的殺蝗昆蟲病原真菌,如今已被全面應用于防治蝗災。孢子作為昆蟲病原真菌的主要侵染器官,同時代表著細胞分化過程的起始與完成,因此在真菌的生長和繁殖過程中起著關(guān)鍵性的作用。產(chǎn)孢是絲狀真菌的繁殖過程,許多絲狀真菌有兩種產(chǎn)孢方式:菌絲在頂端或側(cè)端分化形成孢子的正常產(chǎn)孢方式;繞過菌絲時期直接形成孢子的微循環(huán)產(chǎn)孢方式。目前,對于昆蟲病原真菌的正常產(chǎn)孢研究的比較多,而對于微循環(huán)產(chǎn)孢研究的略少。微循環(huán)產(chǎn)孢由于缺乏或極大地限制了菌絲的生長,故與正常產(chǎn)孢過程相比有不少優(yōu)點,比如提高孢子產(chǎn)量,縮短產(chǎn)孢時間,增強孢子的抗逆性能等。因此,研究調(diào)控微循環(huán)產(chǎn)孢的機制能為改良生防真菌提供理論基礎和新的技術(shù)指導。本研究篩選了蝗綠僵菌正常產(chǎn)孢與微循環(huán)產(chǎn)孢過程中差異表達的基因C6轉(zhuǎn)錄因子MaRcp進行了功能研究。利用生物信息學分析得出蝗綠僵菌MaRcp的cDNA全長為954 bp,編碼34.9 kDa的蛋白質(zhì),等電點為8.2。此外,還發(fā)現(xiàn)其含有一個類似于GAL4的Zn(II)2Cys6雙核簇結(jié)構(gòu)域。通過構(gòu)建C6轉(zhuǎn)錄因子MaRcp的缺失及回復菌株,研究了MaRcp在蝗綠僵菌中的功能,結(jié)果表明MaRcp缺失后蝗... 

【文章來源】：重慶大學重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Zn(II)2Cys6鋅簇蛋白的結(jié)構(gòu)示意圖

33圖 2.1 MaRcp 的保守結(jié)構(gòu)域比對和系統(tǒng)發(fā)育樹分析（A）MaRcp 的結(jié)構(gòu)特征；（B）不同物種間 C6 轉(zhuǎn)錄因子的同源比對，發(fā)現(xiàn)其均含有 Zn(II)2Cys6雙核簇結(jié)構(gòu)域；（C）MaRcp 的系統(tǒng)發(fā)育樹分析Fig.2.1 Conserved domain sequence alignment and phylogenetic analysis of MaRcp(A) Conservative structure domain position in N-terminal of MaRcp which contain 44aa predictedby SMART software. (B) Alignments of amino acid sequences of Zn(II)2Cys6 binuclear clusterdomain with orthologues from other fungi. Asterisks indicate six conserved cysteines. (C)Phylogenetic analysis of MaRcp with MEGA 4.0.

圖2.2 C6轉(zhuǎn)錄因子敲除、回復載體的構(gòu)建示意圖及Southern驗證圖（A）構(gòu)建敲除與回復載體的模式圖；（B）Southern blot 驗證正確轉(zhuǎn)化子的結(jié)果圖。Fig.2.2 Schematic of deletion and complementation strains construction and vertification.(A) Pattern diagram of deletion and complementation strain construction. (B) Transformantsvertification by Southern blot.2.3.3 MaRcp 缺失后，在 1/4 SDAY 培養(yǎng)基上產(chǎn)孢方式發(fā)生改變由于 MaRcp 來源于在正常產(chǎn)孢與微循環(huán)產(chǎn)孢中差異表達的基因，我們想知道MaRcp 的產(chǎn)孢方式如何，因此觀察了 WT、ΔMaRcp 以及 CP 菌株在 SYA、1/4 SDAY培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢方式（Fig.2.3）。我們發(fā)現(xiàn)在 SYA 培養(yǎng)基上 WT、ΔMaRcp、CP菌株的產(chǎn)孢方式無差異，均為微循環(huán)產(chǎn)孢（Fig.2.3A）。而在 1/4 SDAY 培養(yǎng)基上，與 WT、CP 菌株相比，ΔMaRcp 產(chǎn)孢方式發(fā)生改變。WT、CP 菌株為正常產(chǎn)孢，菌絲細長發(fā)達，且不斷向前延伸，在 20 h 才形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)；而 ΔMaRcp 菌株為微循環(huán)產(chǎn)孢，菌絲粗短，在 14 h 即形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，20 h 已經(jīng)大量產(chǎn)孢，其產(chǎn)孢時間提前了近 6 h（Fig.2.3B）。

【參考文獻】：
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本文編號：2909231