球孢白僵菌硫醇/二硫化物氧化還原酶系和兩個內(nèi)吞標志位點蛋白的功能解析
發(fā)布時間：2020-12-06 09:46
球孢白僵菌（Beauveria bassiana）是經(jīng)典的絲狀昆蟲病原真菌,被廣泛用于農(nóng)林害蟲的生物防治�；谇蜴甙捉┚闹苿┰谔镩g應(yīng)用中常遭受高溫、陽光紫外輻射、化學(xué)農(nóng)藥等環(huán)境因子的脅迫制約,影響其生物防治潛能的發(fā)揮。除了環(huán)境脅迫因子,生防真菌在進入昆蟲體內(nèi)后還會遭遇到由寄主細胞免疫應(yīng)答所引起的脅迫。因此,開展白僵菌抗逆生物學(xué)研究,揭示抗逆性狀的分子基礎(chǔ)及其對生防潛能的影響,是合理應(yīng)用生防真菌制劑防治農(nóng)林害蟲的科學(xué)依據(jù)。在田間環(huán)境及宿主體內(nèi)雙重脅迫作用下真菌細胞不可避免地被活性氧自由基（reactive oxygen species, ROS）損傷。谷氧還蛋白-谷胱甘肽氧化還原酶系（Glutaredoxin-Glutathione Reductase, GRX-GLR）及硫氧還蛋白氧化還原酶系（Thioredoxin-Thioredoxin Reductase,TRX-TRR）是真菌及其重要的抗氧化機制,是抵御ROS損傷含硫生物大分子的主要屏障。然而,這兩大抗氧化酶系在昆蟲病原性絲狀真菌中的生物學(xué)功能目前知之不多。因此,研究這兩大酶系內(nèi)部的相互作用及其與超氧化物歧化酶（Superox...
【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：138 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
圖１．１?ＧＲＸ－ＧＬＲ氧化逐原循環(huán)體系．??
ＮＡＤＰＨ??則最終被谷脫甘膚還原酶ＧＬＲ和ＮＡＤＰＨ還原生成??圖１．１?ＧＲＸ－ＧＬＲ氧化逐原循環(huán)體系．??ＧＳＨ。因此，整個氧化還原循環(huán)體系由階段性的還原?Ｐ．?ｉｉＴｈ?Ｈ?，??Ｆｉｇ．?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｄｏｘ?ｓｙ＾ｅｍ?ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ??ＧＲＸ，?ＧＬＲ?ａｎｄ?ＮＡＤＰＨ?．??型ＧＲＸ、氧化型ＧＲＸ、ＧＳＨ、ＧＬＲ及ＮＡＤＰＨ構(gòu)成（圖??１．１）。??酵母的雙硫醇ＧＲＸ釀酒酵母基因組中含有兩個同源基因分別編碼雙硫醇的??ＳｃＧｒｘｌ及ＳｃＧｒｘ２?（Ｌｕｉｋｅｎｈｕｉｓ?ｅ／ａ／．，?１９９８）。盡管序列一致性達６４％，它們僅有部分功??能重疊。從轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制上看，脅迫刺激下的ｇａ／及轉(zhuǎn)錄上調(diào)分別受到轉(zhuǎn)錄因??子Ｍｓｎ２和Ｍｓｎ４的調(diào)控（Ｇａｓｄｉ?ｅ／?〇／．，?２０００）。雖然在咕〇２脅迫誘導(dǎo)的ｇｒｘ／及各ｎｒ２表??達水平相似，但在滲透壓和熱脅巧下的表達量增幅大于ｇｒｘ２。而當茵體生長進??入穩(wěn)定期后和轉(zhuǎn)錄變化則出現(xiàn)相反的趨勢（Ｇｒａｎｔ?Ｗ?２０００）〇Ｇｒｘｌ及Ｇｒｘ２??分布枉酵母胞質(zhì)中
養(yǎng)物抽提液中還原型谷狀甘肋ＧＳＨ和氧化?＃?ＭＯＭ?一ＴＭ句??巧?ｉＪＳＳｊ??型合脫甘肋ＧＳＳＧ的含ｆｉ，其原理如圖２．２圖２．２ＤＴＮＢ循琳去測定ＧＳＨ含最示意圖．??Ｆｉｇ．?２．２?Ａｓｓａｙ?ｏｆ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ?ＧＳＨ?ｌｅｖｅｌ?ｉｎ??巧不。ＧＳＨ?與一硫代一雅基巧甲酸（ＤＴＮＢ）?ｔｈｅ?ｃｙｃｌｅ?ｒｅａｔｉｏｎ?ｏｆＤＴＮＢ．??反應(yīng)，生成較穩(wěn)定黃色的５－硫代二硝基苯甲酸陰離子（ＴＮＢ），在４１２?ｎｍ處測定??其吸收光度則可計算出ＧＳＨ的含ｆｉ（Ｖａｎｄｅｐｉｍｅ?ｅ／?口／．，?１９９４）。谷脫甘化還原巧??（ＧＬＲ）能催化ＧＳＳＧ還原生成ＧＳＨ，通過測定ＧＳＨ的生成Ｓ，可推寡出ＧＳＳＧ??的含?Ｍ（夏亦明．１９９０；Ｔｉｅｔｚｅｅ／口／．，１９６９）。??總谷化甘化含量Ｔ－ＧＳＨ測定將５０?各菌株培養(yǎng)物抽提液與４００?ｎｌ試劑１??２４??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]現(xiàn)代殺菌劑抗性研究進展[J]. 祁之秋,王建新,陳長軍,周明國. 農(nóng)藥. 2006(10)
[2]具咪唑基殺菌劑的研究開發(fā)進展[J]. 王敏,張一賓. 現(xiàn)代農(nóng)藥. 2003(01)
[3]Discovery and demonstration of the teleomorph of Beauve-ria bassiana （Bals.） Vuill.,an important entomogenous fungus[J]. LI Zengzhi, LI Chunru, HUANG Bo & FAN MeizhenResearch Center for Entomogenous Fungi, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China. Chinese Science Bulletin. 2001(09)
[4]球孢白僵菌菌株抗紫外線能力與毒力的關(guān)系[J]. 黃長春,湯堅. 森林病蟲通訊. 1998(04)
[5]總谷胱甘肽的測定方法[J]. 夏弈明. 營養(yǎng)學(xué)報. 1990(01)
本文編號：2901172
【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：138 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
圖１．１?ＧＲＸ－ＧＬＲ氧化逐原循環(huán)體系．??
ＮＡＤＰＨ??則最終被谷脫甘膚還原酶ＧＬＲ和ＮＡＤＰＨ還原生成??圖１．１?ＧＲＸ－ＧＬＲ氧化逐原循環(huán)體系．??ＧＳＨ。因此，整個氧化還原循環(huán)體系由階段性的還原?Ｐ．?ｉｉＴｈ?Ｈ?，??Ｆｉｇ．?１．１?Ｔｈｅ?ｒｅｄｏｘ?ｓｙ＾ｅｍ?ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ??ＧＲＸ，?ＧＬＲ?ａｎｄ?ＮＡＤＰＨ?．??型ＧＲＸ、氧化型ＧＲＸ、ＧＳＨ、ＧＬＲ及ＮＡＤＰＨ構(gòu)成（圖??１．１）。??酵母的雙硫醇ＧＲＸ釀酒酵母基因組中含有兩個同源基因分別編碼雙硫醇的??ＳｃＧｒｘｌ及ＳｃＧｒｘ２?（Ｌｕｉｋｅｎｈｕｉｓ?ｅ／ａ／．，?１９９８）。盡管序列一致性達６４％，它們僅有部分功??能重疊。從轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制上看，脅迫刺激下的ｇａ／及轉(zhuǎn)錄上調(diào)分別受到轉(zhuǎn)錄因??子Ｍｓｎ２和Ｍｓｎ４的調(diào)控（Ｇａｓｄｉ?ｅ／?〇／．，?２０００）。雖然在咕〇２脅迫誘導(dǎo)的ｇｒｘ／及各ｎｒ２表??達水平相似，但在滲透壓和熱脅巧下的表達量增幅大于ｇｒｘ２。而當茵體生長進??入穩(wěn)定期后和轉(zhuǎn)錄變化則出現(xiàn)相反的趨勢（Ｇｒａｎｔ?Ｗ?２０００）〇Ｇｒｘｌ及Ｇｒｘ２??分布枉酵母胞質(zhì)中
養(yǎng)物抽提液中還原型谷狀甘肋ＧＳＨ和氧化?＃?ＭＯＭ?一ＴＭ句??巧?ｉＪＳＳｊ??型合脫甘肋ＧＳＳＧ的含ｆｉ，其原理如圖２．２圖２．２ＤＴＮＢ循琳去測定ＧＳＨ含最示意圖．??Ｆｉｇ．?２．２?Ａｓｓａｙ?ｏｆ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ?ＧＳＨ?ｌｅｖｅｌ?ｉｎ??巧不。ＧＳＨ?與一硫代一雅基巧甲酸（ＤＴＮＢ）?ｔｈｅ?ｃｙｃｌｅ?ｒｅａｔｉｏｎ?ｏｆＤＴＮＢ．??反應(yīng)，生成較穩(wěn)定黃色的５－硫代二硝基苯甲酸陰離子（ＴＮＢ），在４１２?ｎｍ處測定??其吸收光度則可計算出ＧＳＨ的含ｆｉ（Ｖａｎｄｅｐｉｍｅ?ｅ／?口／．，?１９９４）。谷脫甘化還原巧??（ＧＬＲ）能催化ＧＳＳＧ還原生成ＧＳＨ，通過測定ＧＳＨ的生成Ｓ，可推寡出ＧＳＳＧ??的含?Ｍ（夏亦明．１９９０；Ｔｉｅｔｚｅｅ／口／．，１９６９）。??總谷化甘化含量Ｔ－ＧＳＨ測定將５０?各菌株培養(yǎng)物抽提液與４００?ｎｌ試劑１??２４??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]現(xiàn)代殺菌劑抗性研究進展[J]. 祁之秋,王建新,陳長軍,周明國. 農(nóng)藥. 2006(10)
[2]具咪唑基殺菌劑的研究開發(fā)進展[J]. 王敏,張一賓. 現(xiàn)代農(nóng)藥. 2003(01)
[3]Discovery and demonstration of the teleomorph of Beauve-ria bassiana （Bals.） Vuill.,an important entomogenous fungus[J]. LI Zengzhi, LI Chunru, HUANG Bo & FAN MeizhenResearch Center for Entomogenous Fungi, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China. Chinese Science Bulletin. 2001(09)
[4]球孢白僵菌菌株抗紫外線能力與毒力的關(guān)系[J]. 黃長春,湯堅. 森林病蟲通訊. 1998(04)
[5]總谷胱甘肽的測定方法[J]. 夏弈明. 營養(yǎng)學(xué)報. 1990(01)
本文編號：2901172
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