發(fā)布時(shí)間：2018-05-07 04:05

  本文選題：多藥耐藥性 + siRNA納米載體　； 參考：《暨南大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性(multidrug resistance,MDR)是惡性腫瘤化療過程中面臨的最常見、最棘手的問題之一,嚴(yán)重危害腫瘤患者的生命。腫瘤細(xì)胞一旦產(chǎn)生耐藥性,往往導(dǎo)致多種化療藥物的治療效果不佳,造成癌癥復(fù)發(fā)以及惡化。大量研究表明,腫瘤多藥耐藥的產(chǎn)生是由多種基因、多種生命過程聯(lián)合參與調(diào)控的復(fù)雜過程,目前已知的耐藥機(jī)制非常多樣且復(fù)雜。因此,逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性是當(dāng)今癌癥治療的一大熱點(diǎn),如何提高腫瘤細(xì)胞對化學(xué)治療藥物的敏感性以及克服腫瘤多藥耐藥性,是生物化學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)亟待解決的重要問題。小干擾RNA(si RNA)可以特異性的抑制某些基因的表達(dá),在靶向基因治療領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。但是,隨著研究的深入,RNA干擾技術(shù)在臨床應(yīng)用中依然存在許多亟待克服的障礙,主要包括體內(nèi)si RNA傳送體系、生化穩(wěn)定性、si RNA的脫靶效應(yīng)、免疫刺激和毒性等。其中,如何將si RNA高效、安全的傳送到靶向部位更是直接關(guān)系到治療的成敗。為此,人們廣泛研究了各類傳送si RNA和化學(xué)藥物的載藥體系,如陽離子聚合物PEI、殼聚糖、多肽以及各類無機(jī)納米粒子,并應(yīng)用于逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞耐藥性等治療的新難題。這些新型的載藥體系都表現(xiàn)出了很好的基因沉默效率,有的還取得令人振奮的抗腫瘤治療效果。阿爾茨海默病(AD),即老年癡呆癥,是一種以記憶和認(rèn)知功能障礙為主要特征的進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病,目前大多數(shù)學(xué)者都認(rèn)為大腦中Aβ的代謝異常引起Aβ聚合沉積從而形成β淀粉樣蛋白斑在AD的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。因此有效的防止或減少Aβ在腦內(nèi)的聚集,是治療AD的重要策略之一�；�于上述的研究背景,本論文中設(shè)計(jì)合成了一系列功能化納米材料,系統(tǒng)研究了它們作為si RNA基因載體及聯(lián)合治療克服腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的能力,旨在尋找潛在的克服腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的si RNA核酸藥物。全文共分為四個(gè)章節(jié)。第一章:緒論,簡要介紹了治療癌癥過程中MDR的發(fā)生機(jī)制以及當(dāng)前克服MDR的兩種主要方法,同時(shí)闡述了當(dāng)下si RNA核酸藥物治療惡性腫瘤中面臨的挑戰(zhàn)。最后重點(diǎn)介紹了納米材料作為si RNA載體聯(lián)合化學(xué)藥物療法在克服腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性上的應(yīng)用與進(jìn)展及本課題的選題目的和意義。第二章:我們采用手性氨基酸(L/D-Arg)修飾的納米硒,結(jié)合雙核釕配合物構(gòu)建了兩種新型的手性si RNA載體(Ru@L-Se NPs、Ru@D-Se NPs),研究其負(fù)載靶向MDR-1基因的si RNA來逆轉(zhuǎn)耐順鉑細(xì)胞A549R多藥耐藥性的性能。我們首先研究了三種載藥體系在A549和A549R細(xì)胞中的基因沉默效率、細(xì)胞毒性以及相關(guān)的凋亡機(jī)理。其次,我們通過腫瘤細(xì)胞異種移植裸鼠模型進(jìn)一步研究了Ru@L-Se NPs-si RNA的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng),并通過體內(nèi)熒光成像對載藥體系進(jìn)行實(shí)時(shí)追蹤,研究藥物的靶向性以及在或體內(nèi)的分布。結(jié)果表明,Ru@L-Se NPs-si RNA能協(xié)同運(yùn)輸化療藥物和基因藥物,顯著下調(diào)P-糖蛋白的表達(dá),增強(qiáng)胞內(nèi)藥物的聚集,從而增加胞內(nèi)釕配合物的療效,并通過激活p53、MAPKs和PI3K/Akt信號通路誘導(dǎo)A549R細(xì)胞的凋亡。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn),Ru@L-Se NPs-si RNA傳送體系能夠顯著增強(qiáng)荷瘤小鼠的抗腫瘤效應(yīng),并對正常器官無明顯損傷。第三章:我們設(shè)計(jì)合成了納米硒/納米釕功能化的金屬有機(jī)骨架化合物(Se@MIL-101和Ru@MIL-101),利用MIL-101孔道的可修飾性和大的比表面積構(gòu)建了兩種新型納米si RNA載體,研究其同時(shí)負(fù)載靶向MDR-1基因的P-si RNA和靶向VEGF的V-si RNA,來逆轉(zhuǎn)耐紫杉醇細(xì)胞MCF-7/T多藥耐藥性的性能。首先,我們評估了兩種載藥體系在MCF-7和MCF-7/T細(xì)胞中的基因沉默效率、細(xì)胞毒性以及相關(guān)的凋亡機(jī)理。其次,我們著重研究了納米粒子對腫瘤細(xì)胞骨架微管蛋白的影響。最后,我們通過腫瘤細(xì)胞異種移植裸鼠模型進(jìn)一步研究了Se@MIL-101-(P+V)si RNA的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)。結(jié)果表明,Se@MIL-101-(P+V)si RNA或Ru@MIL-101-(P+V)si RNA不僅表現(xiàn)出高效的基因沉默效應(yīng),能夠下調(diào)P-gp和VEGF的表達(dá),還能夠通過改變Bcl-2/Bax的表達(dá)、激活caspase-3及調(diào)控PI3K/AKT/m TOR和MAPK/ERK途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。并且Se@MIL-101和Ru@MIL-101可以顯著影響細(xì)胞內(nèi)微管蛋白的穩(wěn)態(tài),擾亂正常有絲分裂紡錘體的形成,能夠阻滯細(xì)胞周期于G1期從而抑制細(xì)胞增殖。第四章:本章設(shè)計(jì)合成了一種摻雜釩的多鉬氧酸鹽。進(jìn)一步在分子水平上改變多鉬氧酸鹽納米晶的形貌和結(jié)構(gòu)特性,探究總結(jié)Mo-POMs與Aβ聚集之間的科學(xué)關(guān)系。我們采用具有靶向腦部Aβ能力的多肽對Mo-POMs進(jìn)行修飾,合成了一個(gè)新型的多肽-多金屬氧酸鹽納米復(fù)合物Peptide@Mo-POM。結(jié)果表明,Peptide@Mo-POM能夠有效抑制Aβ40自身的聚集和Zn2+誘導(dǎo)的纖維化。同時(shí),對于已經(jīng)形成的Aβ纖維還表現(xiàn)出了良好的降解能力。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn),Peptide@Mo-POM能有效增加PC12細(xì)胞的活性,對細(xì)胞起到保護(hù)作用,并且能有效降低Aβ40纖維對PC12凋亡誘導(dǎo)能力,降低活性氧水平。最后,通過構(gòu)建BBB體外模型研究發(fā)現(xiàn),Peptide@Mo-POM具有良好的透過血腦屏障的能力。
[Abstract]:Cancer cell multidrug resistance ( MDR ) is one of the most common and most intractable problems in cancer chemotherapy . In this paper , we studied the effect of three kinds of drug - carrying systems on tumor cell skeleton microtubular protein . The results showed that the expression of the gene silencing efficiency , cytotoxicity and apoptosis in MCF - 7 and MCF - 7 / T cells were significantly reduced .

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5;TB383.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Overcoming drug efflux-based multidrug resistance in cancer with nanotechnology[J];癌癥;2012年02期

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本文編號：1855312