一、人類(lèi)白細(xì)胞抗原一G(HLA—G)HLA—G是人類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體，屬非經(jīng)典性人類(lèi)白細(xì)胞抗原I類(lèi)基因，由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成。HLA—G蛋白有4個(gè)膜結(jié)合性亞型(HLA—G1、G2、G3、G4)和3個(gè)可溶性亞型(HLA一05、G6、G7)。與經(jīng)典性人類(lèi)白細(xì)胞抗原不同，HLA-G分子多態(tài)性有限，只存在有限數(shù)量的等位基因。HLA—G 高度選擇性地在母胎界面組織表達(dá)，主要分布在絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)層。母體對(duì)胚胎的免疫耐受以及早期胚胎細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和著床是妊娠成功的兩個(gè)關(guān)鍵的因素。近年的研究認(rèn)為，HLA—G可能與早期胚胎的生殖免疫學(xué)和生殖生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān)。

　　二、HLA—G在早期胚胎的表達(dá)1996年，Jurisicova等 首次發(fā)現(xiàn)，人胚胎的卵裂期、桑葚期胚胎及囊胚均有HLA—G 的表達(dá)，還發(fā)現(xiàn)HLA-G表達(dá)胚胎的卵裂率增加。我們的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，人類(lèi)著床前胚胎表達(dá)HLA—G的各個(gè)亞型，不同的階段和不同的胚胎存在表達(dá)差異，囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)不表達(dá)HLA—G蛋白，滋養(yǎng)層細(xì)胞則表達(dá)HLA-G蛋白。我們通過(guò)檢測(cè)胚胎干細(xì)胞的HLA—G 表達(dá)，也證實(shí)了胚胎內(nèi)細(xì)胞不表達(dá)HLA—G。2002年，F(xiàn)uzzi等通過(guò)檢測(cè)體外受精(IVF)胚胎培養(yǎng)液發(fā)現(xiàn)，人胚胎在4～8細(xì)胞階段分泌可溶性HLA—G(silLA—G)，這一分泌與IVF胚胎的成功著床密切相關(guān)。HLA—G在早期胚胎的表達(dá)顯示其在胚胎早期生長(zhǎng)發(fā)育和著床上可能發(fā)揮作用。

　　三、HLA—G與胚胎生長(zhǎng)發(fā)育和著床相關(guān)性的臨床研究近年來(lái)，我們開(kāi)展了sHLA—G與IVF／ICSI結(jié)局相關(guān)性的多中心回顧性臨床研究，探討HLA—G在胚胎生長(zhǎng)發(fā)育和著床中的作用。共檢測(cè)了全國(guó)九家生殖醫(yī)學(xué)中心924個(gè)IVF周期的2，041份胚胎培養(yǎng)液。結(jié)果顯示，25．5 (521份)檢測(cè)到sHLA-G表達(dá)。sHLA—G陽(yáng)性胚胎移植周期的臨床妊娠率和胚胎種植率均高于陰性周期(53．9 vs．37．3 ；32．5 vs．23．0 )(P< 0．05)。妊娠相關(guān)因素的Logistic多元回歸分析顯示，sHI A—G 陽(yáng)性表達(dá)與IVF／ICSI妊娠結(jié)局呈正相關(guān)關(guān)系(未發(fā)表資料)。

　　此后，我們進(jìn)一步開(kāi)展了silLA—G 與IVF／ICSI結(jié)局相關(guān)性的前瞻性、隨機(jī)對(duì)照臨床研究。實(shí)驗(yàn)組在凍融胚胎移植(FET)周期中移植sHLA—G陽(yáng)性胚胎，臨床妊娠率66．7%(29／43)，種植率41．3%(38／92)；而對(duì)照組在FET 周期中移植sHLA—G陰性胚胎，臨床妊娠率50．0%(38／76)，種植率30．3%(56／185)。結(jié)果顯示，sHLA—G 陽(yáng)性胚胎有較高的臨床妊娠率和種植率(未發(fā)表資料)。近年來(lái)，國(guó)際上的相關(guān)研究也顯示，分泌sHLA—G的胚胎的IVF／ICSI臨床妊娠率和種植率較高。我們對(duì)近1O年來(lái)sHLA—G 與IVF／ICSI結(jié)局相關(guān)性研究進(jìn)行了Meta分析。共檢索分析了418篇文獻(xiàn)，納入15篇文獻(xiàn)進(jìn)行Meta分析，研究對(duì)象共4，824例。結(jié)果顯示：與silLA—G 陰性組相比，silLA—G 陽(yáng)性組種植率、妊娠率和活產(chǎn)率有所提高，合并效應(yīng)統(tǒng)計(jì)量OR依次為：3．19(95 CI：1．30—7．81，P一0．01)、4．43(95％CI：2．85—6．89，P一0．00)和2．47(95 CI：1．21—5．05，P一0．01)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(未發(fā)表資料)。因此，我們認(rèn)為胚胎sHI A—G檢測(cè)陽(yáng)性與IVF／ICSI較好的臨床結(jié)局相關(guān)。但是，sHLA—G與IVF／ICSI妊娠結(jié)局間的相關(guān)性仍需更精確的檢測(cè)技術(shù)和進(jìn)一步的分子機(jī)制研究。

　　四、HLA—G在胚胎生長(zhǎng)發(fā)育和著床中作用的分子機(jī)制研究為了進(jìn)一步研究HLA—G在早期胚胎中作用的相關(guān)分子機(jī)制，我們構(gòu)建了RNAi腺病毒載體轉(zhuǎn)染人滋養(yǎng)細(xì)胞降調(diào)節(jié)HLA—G模型，筆耕論文新浪博客，采用自然殺傷細(xì)胞毒試驗(yàn)觀察滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)自然殺傷細(xì)胞的耐受。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HLA—G降調(diào)節(jié)后，滋養(yǎng)細(xì)胞的免疫耐受下降，提示了HI A～G 在母胎免疫耐受中的可能作用_5j。通過(guò)HLA—G在胚胎干細(xì)胞的過(guò)表達(dá)和免疫耐受研究，進(jìn)一步證實(shí)了HLA—G所具有的免疫耐受作用。滋養(yǎng)細(xì)胞的粘附和浸潤(rùn)是早期胚胎著床和胎盤(pán)形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。采用滋養(yǎng)細(xì)胞HLA—G降調(diào)節(jié)模型，我們進(jìn)一步研究了HLA—G對(duì)細(xì)胞粘附和浸潤(rùn)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HLA—G降調(diào)節(jié)后，滋養(yǎng)細(xì)胞的粘附和浸潤(rùn)能力下降。因此，HLA—G有可能參與胚胎著床相關(guān)的粘附和浸潤(rùn)過(guò)程。我們采用HLA—G小干擾RNA腺病毒載體轉(zhuǎn)染卵裂期人胚胎，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染胚胎的卵裂率和囊胚形成率下降，顯示HLA—G可能與胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)。

　　為進(jìn)一步研究sHLA—G在胚胎生長(zhǎng)和著床中的分子機(jī)制，我們構(gòu)建了sHLA—G原核細(xì)胞表達(dá)體系，并采用蛋白重構(gòu)試劑盒將重組蛋白sHLA—G純化及重構(gòu)。采用sHLA—G重組蛋白和滋養(yǎng)層細(xì)胞與子宮內(nèi)膜細(xì)胞共培養(yǎng)體外模型，我們研究了silLA—G對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞粘附的影響，發(fā)現(xiàn)sHLA—G促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞與子宮內(nèi)膜細(xì)胞的粘附。應(yīng)用微量蛋白熒光標(biāo)記重組sHLA蛋白，與子宮內(nèi)膜細(xì)胞共培養(yǎng)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)sHLA—G與子宮內(nèi)膜細(xì)胞的特異性結(jié)合能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)sHLA—G與子宮內(nèi)膜細(xì)胞特異結(jié)合。進(jìn)一步采用PCR檢測(cè)顯示，子宮內(nèi)膜細(xì)胞表達(dá)HLA—G 受體KIR2DL4。

　　人絨毛膜促性腺激素(HcG)由滋養(yǎng)細(xì)胞分泌，在早期妊娠的發(fā)生和維持中發(fā)揮重要作用。我們研究了HLA—G對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞生成J3一HCG 的作用及其可能調(diào)控機(jī)制。采用小干擾RNA轉(zhuǎn)染HI A-G表達(dá)陽(yáng)性的JEG-3滋養(yǎng)細(xì)胞，建立HLA—G降調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞模型；構(gòu)建HLA—G 慢病毒載體，感染HLA—G表達(dá)陰性的BeWo滋養(yǎng)細(xì)胞 ，建立穩(wěn)定表達(dá)HLA—G的滋養(yǎng)細(xì)胞模型。通過(guò)檢測(cè)過(guò)表達(dá)和降調(diào)節(jié)HLA-G細(xì)胞系B—HCG水平顯示，HLA—G促進(jìn)l3一HCG的表達(dá)。進(jìn)一步的研究還顯示，HLA—G對(duì)8一HCG的調(diào)控是通過(guò)MEK1／2信號(hào)傳導(dǎo)通路。

　　HLA—G在早期胚胎的調(diào)控機(jī)制研究對(duì)于闡明其在胚胎生長(zhǎng)發(fā)育和著床的作用具有意義。白血病抑制因子(LIF)是重要的胚胎種植相關(guān)因子。我們研究了LIF對(duì)HLA—G的調(diào)控機(jī)制。采用流式細(xì)胞技術(shù)和Western blot，我們發(fā)現(xiàn)LIF促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)HLA—G，這一調(diào)控作用呈時(shí)間和劑量依賴型(未發(fā)表資料)。而這一調(diào)控是通過(guò)MARK信號(hào)傳導(dǎo)通路完成。我們近年的研究還顯示，microRNA在滋養(yǎng)細(xì)胞HLA—G的調(diào)控中發(fā)揮作用。在陽(yáng)性表達(dá)HLA-G 的滋養(yǎng)細(xì)胞系JEG一3中過(guò)表達(dá)miR一152，導(dǎo)致HLA—G的表達(dá)下降，NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解增加。這一結(jié)果提示，miR一152具有降調(diào)節(jié)HLA—G的作用[Io3。

　　綜上所述，HLA—G在早期胚胎的表達(dá)、功能和分子機(jī)制研究顯示，HLA—G在人類(lèi)早期胚胎的生長(zhǎng)、發(fā)育、著床等環(huán)節(jié)上起重要作用。HIA—G有可能成為胚胎生長(zhǎng)和著床潛能檢測(cè)的標(biāo)志性分子。

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