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天麻多糖的提取、純化及活性研究
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本站編輯：admin 日期： 2010-07-21 20:14 點(diǎn)擊：次
【中文摘要】:
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【中文摘要】天麻(Gastrodia elata Blume)屬蘭科非自養(yǎng)型植物的干燥塊莖,是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥,主產(chǎn)于陜西、云南、貴州及四川等省。中醫(yī)臨床主要用于治療頭痛眩暈、驚風(fēng)抽搐、肢體麻木、面肌痙攣、高血壓、冠心病等疾病。目前,國(guó)內(nèi)天麻方面的研究?jī)H限于天麻素,而關(guān)于天麻中多糖的相關(guān)信息未見(jiàn)任何系統(tǒng)的報(bào)道。故本研究旨在對(duì)天麻多糖的提取分離和性質(zhì)活性方面做初步的摸索,為今后天麻多糖的利用和開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)以天麻作為原料,系統(tǒng)的研究了天麻多糖水提取和超聲波提取的技術(shù)條件,對(duì)天麻多糖進(jìn)行了分離純化研究,并對(duì)其抗氧化和抑菌的活性進(jìn)行了評(píng)價(jià),對(duì)純化后所得兩種多糖的理化性質(zhì)和單糖組成進(jìn)行了探討,研究的主要結(jié)果如下:1.建立了以蒽酮-硫酸法測(cè)定天麻多糖含量的測(cè)定方法。2.采用傳統(tǒng)水提取和超聲波技術(shù)提取天麻多糖,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面分析法對(duì)天麻多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。傳統(tǒng)水提取的最優(yōu)工藝參數(shù)為:提取溫度為58℃,提取時(shí)間36min,料水比1:37,天麻多糖提取率為9.25%。超聲波水提取天麻多糖的最優(yōu)工藝參數(shù)為:提取溫度為66℃,提取時(shí)間34min,料水比1:45,天麻多糖提取率為32.78%。超聲波浸提時(shí),粗多糖提取率均比傳統(tǒng)熱水浸提時(shí)高。3.天麻多糖的分離純化。經(jīng)試驗(yàn)確定了以下純化路線:進(jìn)行乙醇分級(jí)醇析,分別收集乙醇濃度為0-40%和40%~80%之間沉淀出的多糖,得到粗多糖G-40和G-80;再經(jīng)木瓜蛋白酶-Sevag法脫蛋白,透析法除去小分子雜質(zhì)及鹽類等步驟,逐級(jí)提高樣品的純度,得到多糖GeB40和GeB80;最后經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析,選取一定最大洗脫峰范圍進(jìn)行多糖的收集,得到多糖GeB40-1和GeB80-4。紫外光譜結(jié)果表明該多糖組分不含蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。4.多糖GeB40-1的理化性質(zhì):白色粉末狀;可溶于水;不溶于無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、正丁醇等有機(jī)溶劑;不含有淀粉類物質(zhì)、還原糖類物質(zhì)和蛋白質(zhì)核酸類物質(zhì);紅外光譜分析表明分子結(jié)構(gòu)中存在α-型糖苷鍵;分子量大于8000D;比旋光度為[α]~(20) =+150.5°;熔點(diǎn)為270.3-271.1℃。采用離子色譜法分析單糖組成結(jié)果為:該多糖由L-鼠李糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-木糖和D-甘露糖五種單糖組成,五種單糖摩爾數(shù)之比L-鼠李糖:D-半乳糖:D-葡萄糖:D-木糖:D-甘露糖=29:1:42:11:2。5.多糖GeB80-4的理化性質(zhì):淺黃色粉末狀;可溶于水;不溶于無(wú)水乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、正丁醇等有機(jī)溶劑;不含有淀粉類物質(zhì)、還原糖類物質(zhì)和蛋白質(zhì)核酸類物質(zhì);紅外光譜分析表明分子結(jié)構(gòu)中存在α型糖苷鍵;分子量大于8000D;比旋光度為[α]20 = -94.7°;熔點(diǎn)為278.5-279.9℃。采用離子色譜法分析其單糖組成結(jié)果為:該多糖由L-鼠李糖、D-半乳糖和D-葡萄糖三種單糖組成,三種單糖摩爾數(shù)之比L-鼠李糖:D-半乳糖:D-葡萄糖=2.5:1:25。6.抗氧化活性試驗(yàn)研究了天麻多糖GeB40和GeB80對(duì)O_2~-·、·OH、DPPH·的清除能力以及其還原能力。結(jié)果表明GeB40和GeB80都具有O_2~-·、·OH、DPPH·的清除能力和較強(qiáng)的還原能力,且清除率隨濃度的增加都有所增強(qiáng),GeB40對(duì)O_2~-·的清除能力強(qiáng)于GeB80;GeB80對(duì)·OH和DPPH·的清除能力以及還原能力都強(qiáng)于GeB40。7.抑菌試驗(yàn)表明天麻多糖GeB40、GeB80和天麻乙醇提取物對(duì)細(xì)菌、真菌均有一定的抑菌效果。GeB40對(duì)大腸桿菌有明顯的抑制作用,對(duì)根霉有一定的抑制作用;GeB80的抑菌作用強(qiáng)于GeB40,對(duì)青霉、根霉等霉菌和金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)抑菌效果,對(duì)腸炎沙門氏菌和枯草芽孢桿菌也有一定抑制作用;天麻乙醇提取物的抑菌活性強(qiáng)于天麻多糖GeB40和GeB80,對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和青霉的抑制作用明顯,對(duì)根霉和腸炎沙門氏菌也有一定抑制作用。8.采用ACE抑制率的體外檢測(cè)法測(cè)定天麻多糖的降血壓活性。結(jié)果表明,天麻多糖GeB40和GeB80都具有很好的降血壓功效,GeB80降血壓活性高于GeB40,在濃度為10 mg·mL~(-1)時(shí)兩者的抑制率都達(dá)到50%以上。本文的創(chuàng)新點(diǎn):1.首次利用超聲波提取、木瓜蛋白酶-Sevag法脫蛋白、透析以及DEAE-52柱層析純化等先進(jìn)工藝,獲得天麻多糖。2.用離子色譜法測(cè)定天麻多糖的單糖組成,采用ACE抑制率的體外檢測(cè)法研究其降血壓活性均具有一定創(chuàng)新性。
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