本文關(guān)鍵詞：大鼠血漿，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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雙銀杏葉提取物對(duì)缺血再灌注大鼠血漿MDA、SOD、PAF、TXB2的影響

發(fā)布時(shí)間：2013-07-03 來源：安徽省醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)信息中心

【摘要】  目的：研究銀杏葉提取物（GBE）對(duì)心肌缺血再灌注（MIR）大鼠血漿MDA、SOD、PAF、TXB2的影響。方法：雄性Wister大鼠30只，隨機(jī)分為3組: 假手術(shù)組、模型組、GBE組，每組10只。檢測(cè)各組動(dòng)物血漿中PAF、TXB2、MDA和SOD活性的變化。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組血中 PAF、TXB2和MDA含量顯著升高（P<0.01），SOD含量顯著降低（P<0.01），GBE組血中 TXB2含量顯著升高（P<0.05），PAF、SOD和MDA含量無顯著性變化（P＞0.05）；與模型組比較，GBE組血中PAF、TXB2和MDA含量有顯著性降低（P<0.05），SOD含量有顯著性升高（P<0.01）。結(jié)論：GBE對(duì)MIR大鼠心肌有保護(hù)和治療作用。

【關(guān)鍵詞】  缺血再灌注損傷；銀杏葉提取物；血小板活化因子；血栓素B2；丙二醛；超氧化物歧化酶

    Abstract   Objective：To study the effect of Ginkgo Biloba L. extraction （GBE）on MDA, SOD, PAF and TXB2 levels in plasma of myocardial ischemia reperfusion （MIR） Wister rats. Methods: 30 male Wister rats were randomized into sham operation group, model group and GBE treatment group（n=10）. MDA, SOD, PAF and TXB2 levels in plasma of 3 groups were determined. Results: Compared with sham operation group, the contents of PAF, TXB2, MDA in plasma of model group rats were obviously increased（P＜0.01）, and SOD content was obviously decreased（P＜0.01）; TXB2 content in plasma of GBE treatment group rats was obviously increased（P＜0.05）, and MDA, SOD and PAF contents were not obviously changed（P＞0.05）.Compared with model group, the content of PAF, TXB2 and MDA in plasma of GBE treatment group rats were obviously decreased（P＜0.05）, and SOD content was obviously increased（P＜0.01）.Conclusion: GBE can protect and treat MIR Wister rats.

    Key words   ischemia reperfusion; Ginkgo Biloba L. extraction （GBE）; PAF; TXB2; MDA; SOD的作用下，聚合而成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。通過改變Acr.單體的濃度和交聯(lián)度，可以控制凝膠孔徑的大小。在不連續(xù)電泳過程中，通過樣品的濃縮效應(yīng)、凝膠分子篩效應(yīng)以及一般分離的電荷效應(yīng)，把酶、蛋白質(zhì)混合物濃縮成區(qū)帶、分離。

    銀杏葉提取物（Ginkgo biloba L. extraction, GBE）是從銀杏葉中提取的黃酮、內(nèi)脂類物質(zhì)。據(jù)報(bào)道銀杏黃酮、銀杏內(nèi)脂類物質(zhì)有清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化的作用［1］；還有報(bào)道這類物質(zhì)有舒張血管平滑肌、增加局部血流量和防治心腦血管疾病的作用［2~4］。所以，近年來對(duì)缺血心肌再灌注（myocardial ischemia reperfusion, MIR）加GBE治療的技術(shù)，挽救了大量心肌缺血患者的生命［2］，但GBE起作用的分子機(jī)制還不清楚。為此，作者特設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)，以研究GBE對(duì)MIR起作用的分子機(jī)制�，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下，以指導(dǎo)臨床用藥。

    1   材料與方法

    1.1   實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1   實(shí)驗(yàn)動(dòng)物   雄性Wister大鼠30只，體重220 g～250 g，購自中國科學(xué)院上海藥物所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

    1.1.2   藥品與試劑   銀杏葉提取物（膠囊），規(guī)格0.2 g×20粒，購自上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司，批號(hào)031204；GBE混懸液：1粒GBE（0.2 g）混懸于2 mL生理鹽水（相當(dāng)于100 mg/mL 的GBE混懸液）；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）試劑盒，購自南京建成生物工程公司；血栓素B2（TXB2）放免試劑盒，購自北京東亞免疫技術(shù)研究所；血小板活化因子（PAF）試劑盒，購自TPI公司。

    1.1.3   實(shí)驗(yàn)儀器   XDH-3B心電圖機(jī)，上海醫(yī)用電子儀器廠生產(chǎn)；DH-150型動(dòng)物人工呼吸機(jī)，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn)；日立CR-22型超速冷凍離心機(jī)，日本日立株式會(huì)社生產(chǎn)。

    1.2   實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1   分組和給藥   實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行動(dòng)物篩選，心電圖檢查無異常者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。將30只大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組、模型組、GBE組，每組10只。在造模前，每日灌胃1次，GBE組灌胃GBE混懸液1 mL（含GBE 100 mg），假手術(shù)組和模型組灌胃生理鹽水1 mL，共灌胃14 d。

    1.2.2   造模與標(biāo)本采集   參照文獻(xiàn)［5］方法造模，其中模型組和GBE組均行冠脈結(jié)扎，缺血30 min，再灌注50 min；假手術(shù)組只行冠脈穿線，但不結(jié)扎。最后一次灌胃后1 h，將大鼠腹腔麻醉，仰臥位固定，頸部去毛，切開皮膚，分離頸前肌，暴露氣管，行氣管插管。插管另端接于動(dòng)物人工呼吸機(jī)行正壓呼吸（呼吸時(shí)比1∶1，呼吸頻率60次/min，潮氣量10 mL/kg），胸部去毛、消毒，縱行切開左側(cè)胸廓皮膚約2 cm，在第四、第五肋間鈍性分離肌層，剪斷左側(cè)胸廓第4肋，用開胸器撐開胸腔，暴露心臟，小心剪開心包膜，以3/8不銹鋼小圓針和6/0號(hào)絲線穿過肺動(dòng)脈圓錐與左心耳交界生化止血飲對(duì)孕鼠藥物流產(chǎn)后子宮內(nèi)膜雌孕激素受體mRNA表達(dá)的影響。

    1.2.3   指標(biāo)觀察和檢測(cè)方法   TXB2用放射免疫分析法直接測(cè)定［6］； SOD、MDA按試劑盒說明書操作測(cè)定，PAF用ELISA法檢測(cè)。測(cè)定工作在中科院上海藥物研究所心血管研究室和徐匯區(qū)中心醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成。

    1.2.4   統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（■±s）表示。兩組間比較用χ2檢驗(yàn)。用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

    2   結(jié)   果

    各組大鼠血漿中PAF、TXB2、MDA、SOD含量比較結(jié)果見表1。

    從表1可見，模型組PAF、TXB2、MDA、SOD各項(xiàng)指標(biāo)與假手術(shù)組比較，均有極顯著差異（P＜0.01）。GBE組各項(xiàng)指標(biāo)與模型組相比，亦有極顯著差異（P＜0.01）。GBE組PAF、MDA、SOD三項(xiàng)指標(biāo)與假手術(shù)組相比無顯著性差異（P＞0.05）。

    3   討   論

    銀杏葉提取物是從銀杏葉中提取的黃酮、內(nèi)脂類物質(zhì)。有文獻(xiàn)報(bào)道，缺血再灌注為自由基的產(chǎn)生提供了適宜條件，于是缺血再灌注時(shí)產(chǎn)生大量活性氧自由基， 而活性氧自由基和細(xì)胞膜脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，生成大量MDA，并使抗氧化酶（SOD） 含量降低，導(dǎo)致氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，清除自由基的能力降低，從而引起心血管組織嚴(yán)重?fù)p傷［1，2，5］。自由基對(duì)心血管組織造成損傷的程度主要與MDA含量及SOD活性變化有關(guān)。本研究中模型組大鼠在心肌缺血再灌注時(shí)血漿MDA含量顯著升高，SOD活性顯著降低；GBE組卻能明顯降低心肌缺血再灌注時(shí)血漿MDA含量，明顯提高SOD含量。說明經(jīng)GBE預(yù)處理的大鼠，能顯著降低缺血再灌注引起的脂質(zhì)過氧化，抑制MDA的生成，具有一定的抗氧化作用。提示GBE具有抗自由基，維持膜功能穩(wěn)定的作用。

    也有文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)冠狀動(dòng)脈阻斷后，冠狀動(dòng)脈循環(huán)中的血小板、白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞受刺激后產(chǎn)生大量PAF，它能激活和趨化中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞引起花生四烯酸和前列腺素等產(chǎn)物的釋放。血栓素A2 （TXA2）是花生四烯酸的重要代謝產(chǎn)物之一，性質(zhì)極不穩(wěn)定，半衰期僅30秒，很快水解為較穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物TXB2。PAF和TXB2具有收縮血管、誘導(dǎo)血小板聚集和形成血栓等作用［3，4，7］。本研究也觀察到：模型組大鼠心肌缺血再灌注時(shí)血漿PAF和TXB2含量顯著升高；GBE預(yù)處理組卻能明顯降低心肌缺血再灌注時(shí)血漿PAF和TXB2含量。說明經(jīng)GBE預(yù)處理的大鼠，能顯著降低血細(xì)胞和血管內(nèi)皮釋放PAF和TXB2的量，減少缺血再灌注時(shí)引起的血管收縮、血小板聚集和血栓形成等。提示GBE具有降低血細(xì)胞和血管內(nèi)皮釋放PAF和TXB2、防止血管收縮、血小板聚集和血栓形成的作用。

    綜上所述，GBE既有明顯降低MDA含量，提高SOD含量，清除自由基，維持膜功能穩(wěn)定的作用；又有拮抗PAF和TXB2釋放，防止血管收縮、血小板聚集和血栓形成的作用。這將為進(jìn)一步利用銀杏葉，開發(fā)一類用于預(yù)防和治療心肌缺血再灌注損傷的有效制劑提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】
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［5］關(guān)懷敏，劉瑞云，王生彥，等. 炎性反應(yīng)在心肌缺血再灌注損傷中的意義及藥物干預(yù)［J］. 中國循環(huán)雜志，1998，13（3）:149-150.

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