MicroRNA-208b通過(guò)負(fù)調(diào)控ROR2抑制人骨肉細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的研究
發(fā)布時(shí)間:2020-12-08 19:40
目的骨肉瘤是一種好發(fā)于兒童和青少年,惡性程度甚高的原發(fā)性骨腫瘤。該腫瘤易在早期出現(xiàn)遠(yuǎn)處肺轉(zhuǎn)移,病死率較高,預(yù)后極差。探索骨肉瘤的具體發(fā)病機(jī)制以及新的診治策略是改善其預(yù)后的重要途徑。MicroRNAs(miRNAs)是一類(lèi)真核生物內(nèi)源性非編碼微小RNA,與靶基因mRNA的3’非編碼區(qū)(3’ UTR)的“種子序列”配對(duì)結(jié)合,從而降解靶基因mRNA或抑制其翻譯。已有文獻(xiàn)報(bào)道,miRNAs表達(dá)失調(diào)在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中具有重要作用,本研究旨在探討miR-208b在骨肉瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)及其對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。方法首先利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)的方法分別檢測(cè)miR-208b在骨肉瘤組織、正常骨組織、人正常成骨細(xì)胞系NHOst和2種骨肉瘤細(xì)胞系(U20S和Saos-2)中的差異性表達(dá)情況,隨后建立穩(wěn)定表達(dá)miR-208b的骨肉瘤細(xì)胞系U2OS和Saos-2;分別通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞周期;裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)觀察骨肉瘤細(xì)胞形成移植瘤生長(zhǎng)能力;劃痕愈合和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)...
【文章來(lái)源】:延邊大學(xué)吉林省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】:115 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【部分圖文】:
圖2.?2首閃熘UZUS、Saos-2細(xì)胞甲]a:表:達(dá)miK-2U8b的雙果檢測(cè)??
Saos-2細(xì)胞的增殖能力的影響。在細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)染miR-208b??mimics或mimics?control后24?h進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并將細(xì)胞接種于12孔??板中,以>50個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞集落為克隆形成的標(biāo)準(zhǔn)。如圖2.4所示,在??骨肉瘤U20S細(xì)胞中,miR-208b?mimics組和mimics?control組細(xì)胞克??隆數(shù)分別為26±3.0,58土4.0,升高miR-208b的表達(dá)可顯著抑制U20S??細(xì)胞的克隆形成能力,兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(K0.?05)。在骨肉瘤??Saos-2細(xì)胞中,miR-208b?mimics組和mimics?control組細(xì)胞克隆數(shù)分??別為27±3.0,56±5.0,升高miR-208b的表達(dá)可顯著抑制Saos-2細(xì)胞??的克隆形成能力,兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(K0.05)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果??表明,過(guò)表達(dá)miR-208b可抑制骨肉瘤細(xì)胞的克隆形成能力。??mimics?control?miR-2()8b?mimics??-??-??mimics?control??80?-i?Esa?miR-208b?mimics??
±1.88)?%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均戶〈0.05)。同樣在骨肉瘤Saos-2??細(xì)胞中有一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。??如圖2.6所示,在骨肉瘤U20S細(xì)胞中,與對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)??miR-208b后Cyclin?E和Cyclin?D1的相對(duì)表達(dá)量均明顯減少??(0.28±0.04,0.42土0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均K0.?01)。同樣??在骨肉瘤Saos-2細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)miR-208b后Cyclin?E和Cyclin?D1??的相對(duì)表達(dá)量均明顯減少(0.?31±0.03,?0.?39±0.04),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)??意義(均K0.?01)而兩種細(xì)胞中CDK4的表達(dá)量均無(wú)明顯變化(均乃0.?05)。??23??
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Exploration of the regulatory effect of miR-21 on breast cancer cell line proliferation and invasion as well as the downstream target genes[J]. Ying Kuang,Ying-Jie Nie. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(05)
[2]miR-181b通過(guò)靶向調(diào)控N-myc下游調(diào)節(jié)基因2影響骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[J]. 邵建立,李志忠,王亮,焦根龍,周志剛,孫國(guó)棟. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
本文編號(hào):2905582
【文章來(lái)源】:延邊大學(xué)吉林省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】:115 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【部分圖文】:
圖2.?2首閃熘UZUS、Saos-2細(xì)胞甲]a:表:達(dá)miK-2U8b的雙果檢測(cè)??
Saos-2細(xì)胞的增殖能力的影響。在細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)染miR-208b??mimics或mimics?control后24?h進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并將細(xì)胞接種于12孔??板中,以>50個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞集落為克隆形成的標(biāo)準(zhǔn)。如圖2.4所示,在??骨肉瘤U20S細(xì)胞中,miR-208b?mimics組和mimics?control組細(xì)胞克??隆數(shù)分別為26±3.0,58土4.0,升高miR-208b的表達(dá)可顯著抑制U20S??細(xì)胞的克隆形成能力,兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(K0.?05)。在骨肉瘤??Saos-2細(xì)胞中,miR-208b?mimics組和mimics?control組細(xì)胞克隆數(shù)分??別為27±3.0,56±5.0,升高miR-208b的表達(dá)可顯著抑制Saos-2細(xì)胞??的克隆形成能力,兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(K0.05)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果??表明,過(guò)表達(dá)miR-208b可抑制骨肉瘤細(xì)胞的克隆形成能力。??mimics?control?miR-2()8b?mimics??-??-??mimics?control??80?-i?Esa?miR-208b?mimics??
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【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Exploration of the regulatory effect of miR-21 on breast cancer cell line proliferation and invasion as well as the downstream target genes[J]. Ying Kuang,Ying-Jie Nie. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(05)
[2]miR-181b通過(guò)靶向調(diào)控N-myc下游調(diào)節(jié)基因2影響骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[J]. 邵建立,李志忠,王亮,焦根龍,周志剛,孫國(guó)棟. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
本文編號(hào):2905582
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