發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 22:40

　　第一部分OTULIN對局灶腦缺血/再灌注大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)炎癥的影響及機(jī)制研究目的1.研究OTULIN在局灶腦缺血/再灌注大鼠大腦皮質(zhì)缺血旁組織內(nèi)表達(dá)的時(shí)間規(guī)律;2.探索OTULIN過表達(dá)對局灶腦缺血/再灌注大鼠是否具有神經(jīng)保護(hù)作用;3.探索OTULIN對局灶腦缺血/再灌注大鼠神經(jīng)炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及機(jī)制;4.探索OTULIN對小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)的影響及機(jī)制。方法1.SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)（Sham）組和模型（tMCAO）組,再灌注后6 h至72 h,采用實(shí)時(shí)定量多聚酶聯(lián)反應(yīng)（RT-qPCR）和免疫印跡（Western Blot）分別檢測大鼠大腦皮質(zhì)缺血旁組織內(nèi)OTULIN mRNA和蛋白質(zhì)含量。再灌注后72 h,免疫熒光觀察Sham組和tMCAO組大鼠大腦皮質(zhì)缺血旁組織內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物Iba-1與OTULIN蛋白共染情況。2.側(cè)腦室轉(zhuǎn)染OTULIN過表達(dá)慢病毒（LV-OTULIN）,空載慢病毒（LV-Scramble）作為對照。大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)（Sham）組、模型（tMCAO）組、模型+LV-Scramble（tMCAO+LV-Scramble）組和模型+LV... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

局灶腦缺血/再灌注損傷誘導(dǎo)SD大鼠腦內(nèi)OTULINmRNA和蛋白表達(dá)增多Fig.1.1Focalcerebralischemia/reperfusioninducedOTULINmRNAandproteinexpression.（A）腦冠狀位切片（TTC染色）：*代表梗死區(qū)，□代表大腦皮質(zhì)缺血旁組織

結(jié)果提示 LV-OTULIN 可有效促進(jìn)大鼠大腦皮質(zhì) OTULIN mRNA（圖 1.2A）和蛋白（圖1.2B-C）表達(dá)（P<0.001）。接下來，我們進(jìn)一步驗(yàn)證側(cè)腦室轉(zhuǎn)染 LV-OTULIN 對 tMCAO 大鼠大腦皮質(zhì)OTULIN 表達(dá)的影響。LV-OTULIN 及 LV-Scramble 側(cè)腦室轉(zhuǎn)染后第 7 d，大鼠隨機(jī)分 為 假 手 術(shù) （ Sham ） 組 、 模 型 （ tMCAO ） 組 、 模 型 +LV-Scramble（tMCAO+LV-Scramble）組和模型+LV-OTULIN（tMCAO+LV-OTULIN）組，于再灌注后 72 h 采用 RT-qPCR 和 Western Blot 檢測 OTULIN mRNA 及蛋白含量。結(jié)果表明tMCAO +LV-OTULIN組大腦皮質(zhì)OTULIN mRNA和蛋白表達(dá)較tMCAO組及tMCAO+LV-Scramble 組 均 顯 著 上 調(diào) （ P<0.001 ）， 而 tMCAO 組 和tMCAO+LV-Scramble 組 OTULIN mRNA 和蛋白含量無明顯差異（P>0.05）。

54圖 1.3 OTULIN 過表達(dá)對局灶腦缺血/再灌注大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用Fig. 1.3 OTULIN overexpression exerted neuroprotective effects in focal cerebralischemia/reperfusion rats.（A）各組大鼠 Longa 評分（n=6）。（B）各組大鼠 Garcia 評分（n=6）。（C）各組大鼠 Bederson評分（n=6）。（D）TTC 染色檢測各組大鼠腦梗死體積。（E）柱狀圖顯示各組大鼠腦梗死體積統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果（n=5）。（E）免疫熒光共聚焦顯示各組大鼠大腦皮質(zhì)缺血旁組織內(nèi) NueN+和


本文編號：2898353