發(fā)布時(shí)間：2020-11-22 05:29

　　 目的:探討顱內(nèi)動(dòng)脈瘤(Intracranial Aneurysm,IA)患者血漿外泌體微小RNA(microRNA,miRNA)的表達(dá)水平,以期尋找預(yù)測(cè)與IA發(fā)生、發(fā)展、破裂密切相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物。方法:本研究共納入69名IA和30名健康成人作對(duì)照,其中IA患者包括30名未破裂動(dòng)脈瘤和39名破裂的動(dòng)脈瘤患者。1.使用外泌體提取試劑盒提取血漿外泌體,通過透射電子顯微鏡與蛋白質(zhì)印記分析鑒定外泌體的形態(tài)與特異性蛋白標(biāo)志物。2.通過高通量測(cè)序技術(shù)在12例IA患者(4例未破裂和8例破裂)和4例健康對(duì)照的篩選隊(duì)列中分析血漿外泌體miRNA表達(dá)譜。此外,通過實(shí)時(shí)熒光定量反應(yīng)(Quantitative Real-Time PCR,qRT-PCR)在99名受試者的驗(yàn)證隊(duì)列中隨機(jī)選擇上述顯著差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行定量分析。3.使用受試者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲線來評(píng)估m(xù)iRNA的診斷效能。結(jié)果:1.本研究提取分離的囊泡物質(zhì),經(jīng)過透射電鏡下觀察外形呈類球形顆粒,直徑范圍為100-150nm;且囊泡狀物表達(dá)外泌體特異性蛋白CD9,HSC70和TSG101。2.在高通量測(cè)序分析中,共鑒定了181個(gè)具有顯著差異(p0.05)表達(dá)水平的外泌體miRNA。與對(duì)照組相比,未破裂IA患者中顯著上調(diào)的外泌體miRNA有9個(gè),下調(diào)的20個(gè)。破裂的IA患者中上調(diào)的外泌體miRNA有21個(gè),下調(diào)的10個(gè)。與未破裂IA患者相比,破裂組中顯著上調(diào)的外泌體miRNA個(gè)數(shù)是92個(gè),下調(diào)的29個(gè)。3.qRT-PCR分析證實(shí)外泌體miR-145-5p和miR-29a-3p在IA患者中顯著上調(diào)。在區(qū)分是否患IA時(shí),miR-29a-3p的ROC曲線下面積(AUC)為0.791,多因素分析顯示外泌體miR-29a-3p可能是IA的獨(dú)立診斷指標(biāo)。在區(qū)分動(dòng)脈瘤是否破裂時(shí),miR-145-5p的AUC為0.773,同樣的,多因素分析顯示外泌體miR-145-5p可能是IA破裂的獨(dú)立診斷指標(biāo)。結(jié)論:本研究初步證實(shí)了IA患者存在特異的血漿外泌體miRNA表達(dá)譜。篩選出的外泌體miR-29a-3p與miR-145-5p與IA的發(fā)生發(fā)展相關(guān),對(duì)診斷IA與預(yù)測(cè)IA破裂具有一定的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R743
【部分圖文】：

NGS血漿外泌體miR-16-5p表達(dá)水平

外泌體的特征

27圖 3-2. 平均表達(dá)量前十的 miRNA（單位：RPKM）。Figure 3-2. The average expression of the top 10 miRNAs (unit: RPKM).
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本文編號(hào)：2894202